1、第一部分、白色念珠菌對巨噬細胞U937的活化作用實驗
　　 目的:觀察白色念珠菌對人巨噬細胞系U937細胞的活化作用。
　　 方法:觀察不同濃度不同作用時間點的白色念珠菌刺激人巨噬細胞系U937細胞后細胞培養(yǎng)液中NO濃度和Galectin-3的表達以及對細胞存活率的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、白色念珠菌終濃度與巨噬細胞系U937細胞存活率與因子表達:在107 PFU/mL及以下時，促進細胞生長，相對存

2、活率升高，細胞中NO及Galectin-3的表達增強，各組間比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);在108 PFU/mL及以上時，可抑制細胞生長，相對存活率降低，細胞中NO及Galectin-3的表達降低，各組間比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2、白色念珠菌作用時間與巨噬細胞系U937細胞存活率與因子表達:白色念珠菌處理3h及以上時，可促進細胞生長，細胞中NO及Galectin-3的表達增強，各組間比較有統(tǒng)計學意義(P＜0

3、.05);白色念珠菌處理3h及以下時，對細胞生長影響不大，細胞中NO及Galectin-3的表達變化不明顯，組別之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、白色念珠菌濃度在107 PFU/mL及以下時，刺激人巨噬細胞系U937細胞活化。對NO濃度和Galectin-3的表達以及對細胞存活率的影響呈正相關(guān)。
　　 2、白色念珠菌作用時間3h及以上時人巨噬細胞系U937細胞活化。
　　 第

4、二部分、半乳糖凝集素-3在白色念珠菌誘導的人巨噬細胞系U937細胞中的表達及其功能
　　 目的:觀察Galectin-3在白色念珠菌誘導的人巨噬細胞系U937細胞中的表達并探討其功能。
　　 方法:通過慢病毒載體介導的Galectin-3-shRNA沉默基因，建立半乳糖凝集素-3基因阻斷的人U937巨噬細胞株模型，體外評價和觀察galectin-3在人巨噬細胞系U937細胞受白色念珠菌感染時的細胞存活率的影響以及細胞培養(yǎng)

5、液中NO濃度、IL-8、TNF-a、COX2、TLR2和TLR4表達的變化，Galectin-3與白色念珠菌的結(jié)合測定，激光共聚焦顯微鏡觀察Galectin-3與TLR2、TLR4的表達分布。
　　 結(jié)果:
　　 1、利用通用引物對菌落進行PCR檢測。獲得陽性克隆4個，送3號樣品進行測序驗證。測序結(jié)果表明，針對galectin-3的shRNA序列已經(jīng)成功連入慢病毒載體。
　　 2、定量PCR和Westernblo

6、t檢測表明細胞內(nèi)的Galectin-3表達受到顯著的敲減。
　　 3、白色念珠菌刺激U937后，可促進細胞生長，細胞中IL-8、TNF-a、COX2、TLR2和TLR4表達增強，NO水平呈上升，組別之間有統(tǒng)計學意義。沉默Galectin-3后細胞生長受到抑制，細胞相對存活率下降，細胞中IL-8、TNF-a、COX2、TLR2和TLR4表達增強，NO水平呈上升，組別之間有統(tǒng)計學意義。
　　 4、結(jié)合測定結(jié)果隨著白色念珠菌濃

7、度的升高，Galectin-3與白色念珠菌的結(jié)合程度相應加深，當濃度在107 PFU/mL及以上時有明顯上調(diào)，組別之間有統(tǒng)計學意義，當濃度在109 PFU/mL時，與108 PFU/mL組相比，無統(tǒng)計學意義。沉默Galectin-3后，得到相似結(jié)果。但是結(jié)合程度較對照組明顯下降。
　　 結(jié)論:
　　 1、本實驗成功構(gòu)建了慢病毒載體介導的Galectin-3-shRNA沉默基因人U937巨噬細胞株模型。
　　 2、

8、Galectin-3對白色念珠菌刺激人巨噬細胞系U937細胞后細胞培養(yǎng)液中NO濃度、IL-8、TNF-α、COX2、TLR2和TLR4表達的調(diào)節(jié)呈負相關(guān)，對細胞存活率的影響呈正相關(guān)。
　　 3、Galectin-3能與白色念珠菌直接結(jié)合。
　　 第三部分、半乳糖凝集素-3在白色念珠菌誘導的人巨噬細胞系U937細胞中的作用機制分析
　　 目的:探討半乳糖凝集素-3在白色念珠菌誘導的人巨噬細胞系U937細胞中的作用機

9、制。
　　 方法:蛋白免疫印跡(Western blot)檢測細胞中FAS、NF-κB、JNK和ERK1/2蛋白含量。
　　 結(jié)果:
　　 1、在Galectin-3被抑制的情況下，白念珠菌感染會造成細胞中FAS和NF-κB蛋白的表達上調(diào)。
　　 2、在Galectin-3被抑制的情況下，白念珠菌感染會造成細胞中磷酸化JNK表達上調(diào)和磷酸化ERK1/2蛋白表達下調(diào)。
　　 結(jié)論:
　　 1