1、目的：關節(jié)軟骨損傷的修復一直是臨床工作的難點。目前臨床上常用治療措施包括：關節(jié)清理術、軟骨下骨鉆孔術、骨軟骨移植、骨膜移植等。這些方法均有一定的臨床效果，但修復效果并不令人滿意，因此尚需要進一步研究。本研究從臨床需要出發(fā)，根據組織工程的原理，通過體外培養(yǎng)骨髓間充質干細胞(marrow stromal cells，MSCs)，以膠原海綿作為支架材料，體外三維復合培養(yǎng)，進行軟骨誘導后，將細胞-支架材料復合物植入狗髕股關節(jié)面全層軟骨缺損處，用

2、以修復軟骨缺損。從形態(tài)學、組織學等方面對植入前的細胞一支架復合體和植入后對關節(jié)軟骨缺損的修復進行觀察和評估，探討MSCs復合膠原材料進行軟骨誘導的可行性，及自體MSCs復合膠原材料對狗關節(jié)軟骨全層缺損修復的效果，為組織工程方法修復關節(jié)軟骨缺損的臨床應用提供基礎。 方法：①家犬10只，分別抽取骨髓，體外培養(yǎng)MSCs，傳代至第三代，復合于膠原海綿支架材料，然后對MSCs進行軟骨誘導，對復合細胞的支架材料進行HE染色和II型膠原免疫組

3、織化學染色；②于家犬髕股關節(jié)面股骨側造直徑5mm全層軟骨缺損模型，以經軟骨誘導的MSCs-膠原材料復合體對缺損進行修復，以同樣面積的未經軟骨誘導的MSCs-膠原材料復合體組和單純膠原材料組對缺損進行修復以作為實驗對照。術后6周和8周分批取材，作如下檢測：(1)大體觀察；(2)HE染色組織學觀察；(3)甲苯胺藍染色用以了解本研究對缺損的修復效果。 結果：l、MSCs復合支架材料進行軟骨誘導后，HE染色可見細胞廣泛分布于支架材料孔隙

4、間，多數(shù)細胞呈多角形或者不規(guī)則形，少數(shù)呈短梭形。Ⅱ型膠原免疫組織化學染色可見支架材料孔隙問的細胞胞漿內的棕黃色顆粒，細胞周圍出現(xiàn)黃染區(qū)。而未經誘導的MSCs細胞Ⅱ型膠原免疫組織化學染色結果為陰性。 2、狗關節(jié)軟骨損傷的修復 ①經軟骨誘導的MSCs-膠原材料復合體組：術后6周大體觀察，缺損表面較為光滑，與周圍正常軟骨組織色澤接近，修復組織與周圍軟骨界限仍可識別，HE切片上可見呈上皮樣生長的細胞，甲苯胺藍染色可見細胞分泌的甲

5、苯胺藍異染軟骨基質；術后8周大體觀察，缺損表面基本光滑，可見較明顯半透明白色組織覆蓋，修復組織與周圍軟骨部分連接，組織缺損基本已修復，HE染色可見修復組織增殖活躍，細胞呈邊緣不規(guī)則的小蜂窩狀結構，周圍有軟骨陷窩形成。甲苯胺藍染色可見細胞分布較6周時更為均勻。 ②未經軟骨誘導的MSCs-膠原材料復合體組：術后6周大體觀察，缺損表面較為光滑，修復組織與與周圍正常軟骨組織界限仍可鑒別，HE切片上可見少數(shù)呈上皮樣生長的細胞，甲苯胺藍染色

6、可見甲苯胺藍異染軟骨基質;術后8周大體觀察，缺損表面基本光滑，可見較明顯半透明白色組織覆蓋，修復組織與周圍軟骨部分連接，組織缺損大部分已修復，HE染色可見修復組織增殖活躍，甲苯胺藍染色可見細胞分布較6周時更為均勻。③單純膠原材料組:術后6周大體觀察標本缺損區(qū)明顯凹陷，與周圍正常軟骨組織之間界限清晰，HE染色可見缺損區(qū)由纖維組織充填，細胞呈纖維細胞樣，周圍未見有異染的基質，損傷區(qū)域未見材料殘留，甲苯胺藍染色未見甲苯胺藍異染的軟骨基質；術后

7、8周時標本缺損處為白色不透明組織覆蓋，表面粗糙，仍可見明顯凹陷，修復組織與周圍軟骨部分連接，HE染色可見缺損區(qū)纖維組織較6周時增多，甲苯胺藍染色仍未見甲苯胺藍異染的軟骨基質。 結論： 1、MSCs種植于膠原材料，經定向軟骨誘導后，可向軟骨組織方向分化。 2、MSCs復合膠原材料定向軟骨誘導對狗關節(jié)軟骨全層缺損具有修復作用，關節(jié)軟骨缺損處有軟骨樣組織填充。 3、隨著組織工程化軟骨植入時間的延長，新生軟骨組織