1、谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性神經(jīng)突觸的主要神經(jīng)遞質，在維持神經(jīng)細胞正常信號傳導中起著重要的作用。在正常情況下，谷氨酸的釋放、攝取和重吸收保持在動態(tài)平衡中，而當其過度釋放或攝取障礙時，谷氨酸大量積聚，腦內濃度急劇升高，過度激活其受體從而引起一系列病理反應，導致神經(jīng)細胞變性壞死。研究證明，腦缺血損傷和許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如老年性癡呆、血管性癡呆等均存在谷氨酸含量過高現(xiàn)象。因此谷氨酸損傷機制的研究對于了解并治療多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有重要的意義。<

2、br>　　 已有報道神經(jīng)元的凋亡、鈣穩(wěn)態(tài)的失調和氧化應激與谷氨酸的興奮性神經(jīng)毒作用有關。但是有關谷氨酸神經(jīng)毒性作用的機制尚未被研究透徹。入神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y細胞是一種較好的神經(jīng)元模型，它已經(jīng)被廣泛用于建立中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病細胞模型。本文以SH-SY5Y細胞為模型研究谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性的機制。
　　 1．谷氨酸誘導入神經(jīng)母細胞瘤細胞凋亡機制的研究MTT法檢測不同濃度的谷氨酸作用不同時間對SH-SY5Y細胞存活率的影響

3、，找到谷氨酸處理的合適的時間及合適的濃度；乳酸脫氫酶釋放量的測定檢測谷氨酸對細胞的損傷程度；DAPI染色法觀察谷氨酸處理后的細胞凋亡形態(tài)學特點；通過以上指標的觀察，確立谷氨酸誘導SH-SY5Y細胞凋亡細胞模型。用鈣流檢測法檢測谷氨酸是否造成人神經(jīng)母細胞瘤細胞鈣穩(wěn)態(tài)失衡，短時間(20min)處理，谷氨酸并未引起SH-SY5Y細胞質內鈣離子濃度升高，而長時間(24h)處理卻造成SH-SY5Y細胞質內鈣離子濃度顯著性升高，NMDA受體拮抗劑M

4、K801及代謝谷氨酸受體拮抗劑LY341495均不能阻止谷氨酸24h內引起的SH-SY5Y細胞質內鈣離子濃度升高，且亦不能對SH-SY5Y細胞起保護性作用。谷氨酸處理24h后，SH-SY5Y細胞內谷胱甘肽總量顯著性減少，超氧化物歧化酶活性降低，胞外丙二醛量增多，說明谷氨酸造成SH-SY5Y細胞氧化損傷。
　　 2．谷氨酸對入神經(jīng)母細胞瘤細胞鈣庫調控的鈣通道功能的影響高濃度（lOmmol/L）的谷氨酸可以抑制Tg（Thapsiga

5、rgin是內質網(wǎng)Ca-ATP酶選擇性抑制劑，可以不可逆地使內質網(wǎng)鈣池排空，使胞質內Ca濃度持續(xù)升高）誘導的SH-SY5Y細胞內質網(wǎng)鈣離子的釋放，進而抑制胞外鈣離子的內流，即抑制CCE。NMDA受體拮抗劑E801、代謝谷氨酸受體拮抗劑LY341495及電壓門控鈣離子通道拮抗劑GdCI3均不能緩解這種現(xiàn)象。
　　 3．丹參酮IIA(Tan IIA)對谷氨酸誘導人神經(jīng)母細胞瘤細胞凋亡的保護作用MTT法檢測不同濃度的Tan IIA24h

6、內對SH-SY5Y細胞存活率的影響，發(fā)現(xiàn)不同濃度的Tan IIA均能顯著性降低谷氨酸對SH-SY5Y細胞存活率的影響；乳酸脫氫酶釋放量的測定檢測到不同濃度的Tan IIA均能顯著性降低谷氨酸對SH-SY5Y細胞的損傷程度；DAPI染色法從形態(tài)學上明顯看到Tan II A對SH-SY5Y細胞有保護作用；鈣流檢測法證實Tan IIA不能阻止谷氨酸24h內引起的SH-SY5Y細胞質內鈣離子濃度升高；Tan IIA能顯著性降低谷氨酸處理24h后

7、，SH-SY5Y細胞內谷胱甘肽總量的減少，超氧化物歧化酶活性的降低，胞外丙二醛量的增多。
　　 4．突變重組人胰高血糖素樣肽一1(mGLP-I)對人神經(jīng)母細胞瘤細胞凋亡的保護作用用cAMP檢測試劑盒檢測到mGLP-I與天然GLP-I(nGLP-I)均能引起細胞內cAMP濃度升高；MTT法檢測不同濃度的mGLP-1/nGLP-124h內對SH-SY5Y細胞存活率的影響，發(fā)現(xiàn)0.02ng/mL-lOng/mL的mGLP-I均可促SH

8、-SY5Y細胞增殖，nGLP-I對細胞存活率沒有影響；用不同濃度的mGLP-1/nGLP-1與谷氨酸同時處理細胞24h，發(fā)現(xiàn)不同濃度的mGLP-I/nGLP-I均能顯著性降低谷氨酸對SH-SY5Y細胞存活率的影響；乳酸脫氫酶釋放量的測定檢測到不同濃度的mGLP-I/nGLP-I均能顯著性降低谷氨酸對SH-SY5Y細胞的損傷程度；DAPI染色法從形態(tài)學上明顯看到mGLP-I/nGLP-1對SH-SY5Y細胞有保護作用；鈣流檢測法證實mGL