1、目的 顱腦損傷時，除外力直接作用造成腦損害外，同時發(fā)生一系列繼發(fā)性病理改變。腦損傷后可引起腦微血管改變與微循環(huán)障礙，從而導致繼發(fā)性腦組織缺血和腦代謝的變化，加重腦水腫。顱腦損傷后的炎性反應和腦微循環(huán)紊亂在這個過程中起重要作用。P-選擇素(P-selectin)，又叫血小板α-顆粒膜蛋白(α—granule membrane protein-140，GMP-140)是血小板活化釋放的特異性指標之一，可以反映體內(nèi)血小板的活化程度及血栓形成

2、傾向；細胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-l，ICAM-l)是機體重要的炎性介質(zhì)之一，是內(nèi)皮細胞和白細胞損害或激活的標志；銀杏葉提取物(Extract of Ginkgo bi loba，EGB)是從銀杏科植物銀杏葉中分離純化的提取物。本實驗研究大鼠腦外傷后P-選擇素和ICAM-1的表達變化及其與腦水腫等繼發(fā)性腦損傷的關系，探討顱腦損傷后腦水腫的分子機制以及EGB的干預作用，為臨床治療提供

3、理論依據(jù)。 方法 第一部分參照Feeney's自由落體致傷法，制作大鼠大腦頂葉局灶皮質(zhì)挫裂傷模型，將72只Spragtle-Dawley大鼠隨機分為3組：A(標準對照組)、B(輕度損傷組)、C組(重度損傷組)，每組24只。分別于腦外傷后6小時、24小時、3天、7天隨機各取標本6只，測定腦含水量，應用HE染色法觀察各時段腦組織病理變化，采用免疫組化方法，應用P-選擇素和細胞間粘附分子-1抗體檢測傷后不同時段大鼠腦組織冰凍切片，檢

4、測P-選擇素和細胞間粘附分子一1在腦組織的表達變化以及免疫陽性染色血管,并獲取傷后不同時間段損傷灶周圍的腦組織，采用實時反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測P-選擇素mRNA和細胞間粘附分子-1mRNA的表達，采集數(shù)據(jù)，采用計算機圖像分析系統(tǒng)和SPSS統(tǒng)計學軟件包進行處理，P<0.05視為差異具有意義。 第二部分仍參照Feeney's自由落體致傷法，制作大鼠大腦頂葉局灶皮質(zhì)挫裂傷模型，72只SD大鼠隨機分為3組：A(標準對

5、照組)，B(小劑量銀杏葉提取物治療組)、C組(大劑量銀杏葉提取物治療組)，每組24只，大鼠模型建立成功后，各治療組大鼠術后每日分別腹腔注射EGB注射液50mg／kg、100mg／kg加生理鹽水和地塞米松，對照組注射等量生理鹽水和地塞米松。傷后6小時、24小時、3天、7天隨機各取標本測定腦含水量，采用免疫組織化學，應用P-選擇素和細胞間粘附分子-1抗體檢測P-選擇素及細胞間粘附分子-1在腦組織的表達變化以及免疫陽性染色血管，取傷后不同時間

6、段損傷灶周圍腦組織行實時反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)，檢測P-選擇素mRNA和細胞間粘附分子-1mRNA表達，采集數(shù)據(jù)，采用計算機圖像分析系統(tǒng)和SPSS統(tǒng)計學軟件包進行處理，與對照組比較，P<0.05視為差異具有意義 結(jié)果致傷后見損傷灶硬膜下出血，腦皮質(zhì)挫裂，壞死和水腫，血栓形成，周圍神經(jīng)元變性，神經(jīng)膠質(zhì)細胞增生。腦損傷后腦皮層的含水量于致傷后6小時增加，24小時達到高峰，持續(xù)約3-5天，7天后接近正常。腦外傷后6小時，P

7、-選擇素和細胞間粘附分子-l的表達顯著升高，于傷后24小時達到高峰，3天后逐漸降低，7天后接近正常。其中細胞間粘附分子-l高峰期出現(xiàn)較晚。腦損傷后損傷灶周圍可見大量免疫陽性染色血管，粒細胞在損傷灶周圍和側(cè)腦室浸潤。重傷組和輕傷組P-選擇素和細胞間粘附分子-1陽性表達與對照組平均積分光密度值各時段均存在顯著差異(P<0.05)。 銀杏葉提取物治療組大鼠損傷灶皮質(zhì)腦含水量顯著低于對照組(P<0.01)，且大劑量銀杏葉提取物治療組大鼠

8、的腦含水量最少。銀杏葉提取物治療組在6小時以后亦出現(xiàn)P-選擇素和細胞間粘附分子-l表達，但陽性細胞染色淺，數(shù)目較少。傷后24小時和3天，P-選擇素和細胞間粘附分子-1表達陽性細胞數(shù)目明顯減少。銀杏葉提取物治療組與對照組在皮質(zhì)損傷邊緣和側(cè)腦室壁等均有P-選擇素和細胞間粘附分子-1陽性表達，而且平均積分光密度值各時段均亦存在顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論大鼠腦損傷后腦組織內(nèi)P-選擇素和細胞間粘附分子-1的表達及粒細胞浸潤顯著升高，

9、其變化規(guī)律與腦外傷后腦水腫等繼發(fā)性損傷的發(fā)展規(guī)律相吻合。P-選擇素和細胞間粘附分子-1表達的增加可能參與了腦外傷后的繼發(fā)性損傷。銀杏葉提取物可以減少P-選擇素和細胞間粘附分子-1表達及中性粒細胞浸潤，明顯減輕神經(jīng)細胞的損傷，其對神經(jīng)元的保護作用可能與抑制P-選擇素和細胞間粘附分子-l的表達有關，而且大劑量組(100mg／kg)作用明顯，小劑量組(50mg／kg)作用稍差。銀杏葉提取物可以試用于治療腦外傷，改善微循環(huán)，減輕炎性反應，促進神