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文檔簡介
1、目的: 1.以體外培養(yǎng)L6骨骼肌細(xì)胞為對象,給予一定濃度胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)干預(yù),檢測GLP-1對糖原合成酶表達(dá)的影響。 2.利用UO126(MAPK抑制劑)阻斷MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,檢測GLP-1對L6骨骼肌細(xì)胞糖原合成酶表達(dá)的影響,從而探討GLP-1在骨骼肌細(xì)胞中介導(dǎo)糖原合成的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 3.為GLP-1的擬胰島素作用及其機(jī)制提供理論依據(jù)。
2、 方法: 1.復(fù)蘇L6骨骼肌細(xì)胞,通過倒置顯微鏡觀察其生長及增值狀況。 2.L6骨骼肌細(xì)胞均等分為6組:A:對照組;B:GLP-1(10-9mol/L)組;C:GLP-1(10-9mol/L)+UO126(10μmol/L)組;D:胰島素(10-9mol/L)組;E:胰島素(10-9mol/L)+UO126(10μmol/L)組;F:GLP-1(10-9mol/L)+胰島素(10-9mol/L)組。A、B、C、D、E和
3、F6組分別培養(yǎng)3分鐘、30分鐘,A、B、D和F組再培養(yǎng)24小時。 3.用Western Blot和免疫組織化學(xué)方法檢測骨骼肌細(xì)胞中的糖原合成酶的表達(dá)。 結(jié)果: 1.GLP-1(10-9mol/L)組在3分鐘、30分鐘及24小時干預(yù)的糖原合成酶的表達(dá)均顯著高于對照組(分別為1997.33±115.47 vs1444.00±94.64,P<0.05;1465.33±86.00 vs1267.33±66.46,P<0.
4、05;1426.67±24.54 vs1326.33±18.84,P<0.05,n=3)。 2.GLP-1(10-9mol/L)+胰島素(10-9mol/L)組在3分鐘、30分鐘及24小時干預(yù)的糖原合成酶的表達(dá)均顯著高于對照組(分別為2209.33±186.18 vs1444±94.64,P<0.05;1565.00±15.39 vs1267.33±66.46,P<0.05;1428.00±36.51 vs1326.33±18.
5、84,P<0.05,n=3)。 3.3分鐘和30分鐘時,GLP-1(10-9mol/L)+UO126(10μmol/L)組的糖原合成酶表達(dá)均顯著低于GLP-1(10-9mol/L)組(分別為1752.67±198.65 vs1997.33±115.47,P<0.05;1395.3±78.21 vs1465.33±86.00,P<0.05,n=3),而在30分鐘時的糖原合成酶表達(dá)顯著高于對照組(1395.33±78.21 vs12
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