1、目的：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一種遺傳--環(huán)境--代謝應激相關性疾病，與胰島素抵抗及其相關的代謝綜合征和遺傳易感性密切相關?！岸未驌簟睂W說認為胰島素抵抗和氧應激/脂質過氧化損傷是NAFLD發(fā)病的兩個關鍵環(huán)節(jié)，因此，當前防治NAFLD的醫(yī)學研究文獻多集中于胰島素抵抗和脂質過氧化損傷兩個方面上，其中胰島素抵抗是NAFLD的觸發(fā)因素，脂質代謝平衡紊亂是它的起始環(huán)節(jié)。由于單純性脂肪肝是一種良性可逆性疾病，因此采取有效治療手段提高胰島

2、素的敏感性，糾正脂質代謝紊亂，是早期防治NAFLD的重點。當肝細胞氧化應激反應所產(chǎn)生的損害超過肝臟自身防御能力時，肝臟就會從單純脂肪變發(fā)展成為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。且非酒精性脂肪性肝病必須通過非酒精性脂肪性肝炎這一中間過度階段才能進展為肝硬化。因此積極治療NASH，可有效防止其發(fā)展為肝硬化和肝癌，改善NAFLD的預后。目前的研究顯示過氧化物酶體增殖物激活受體-α(PPARa)可通過對肝內脂肪酸氧化和炎癥反應相關基因表達的調控，

3、在肝臟脂類代謝和炎癥反應中發(fā)揮重要作用，其功能缺陷不僅可引起肝細胞脂肪變性，還與NASH、肝硬化和肝癌的發(fā)生密切相關。同時最新的研究還發(fā)現(xiàn)硫氧還蛋白(Trx)不僅與NAFLD的嚴重度相關，還與PPARα的轉錄調控有關。本實驗旨在通過動態(tài)觀察高脂飲食誘導的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝細胞PPARa及Trx的表達變化，研究其在NAFLD發(fā)病中的作用及相關性，并探討降脂益肝沖劑預防和治療NAFLD的藥效及機制。 方法：健康Wistar雄鼠

4、56只，隨機分為7組：正常對照組(N)、模型Ⅰ組(M1)、模型Ⅱ組(M2)、模型Ⅲ組(M3)和中藥Ⅰ組(D1)、中藥Ⅱ組(D2)、中藥Ⅲ組(D3)，每組各8只大鼠。除正常組給予普通飼料喂養(yǎng)外，其余各組均飼喂高脂飲食。其中中藥Ⅰ組于實驗開始給予高脂飼養(yǎng)的同時中藥灌胃8周，8周末與正常組和模型Ⅰ組共同處死；中藥Ⅱ組則在高脂飼養(yǎng)8周后中藥灌胃5周，于13周末同模型Ⅱ組共同處死；中藥Ⅲ組則在高脂飼養(yǎng)13周后中藥灌胃5周，于18周末同模型Ⅲ組共同

5、處死。 測體重、體長，并計算肝指數(shù)(肝濕重/體重×100％)、Lee's指數(shù)(體重<'0.33>/體長×1000)等體質指標；全自動生化分析儀測定丙氨酸轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)、血脂及肝組織脂質含量；葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖(FBG)，銅染色法測定血清和肝組織游離脂肪酸(FFA)水平，放免法測定血清空腹胰島素(FINs)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，計算胰島素敏感指數(shù)(ISI=1/FINS×FBG)；

6、黃嘌呤氧化酶法測定血清和肝組織SOD活性；硫代巴比妥酸法測定血清和肝組織MDA含量；光鏡下評估脂肪變性和炎癥活動情況；逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)測定PPAR α和Trx m RNA的表達。 結果：8周后模型Ⅰ組大鼠出現(xiàn)了明顯的脂質代謝紊亂，伴隨高胰島素血癥和胰島素抵抗；血清轉氨酶水平較正常組明顯升高，TNF-α水平升高；肝組織中SOD活力較正常組無明顯差異，MDA含量較正常組大鼠雖有所升高，但與正常大鼠相比亦無統(tǒng)計學差異

7、(P值均>0.05)；此時肝臟出現(xiàn)了輕到中度脂肪變，但無炎細胞浸潤。說明胰島素抵抗在NAFLD發(fā)病初期肝細胞脂肪變性過程中起到關鍵作用，而氧應激在此時并未發(fā)揮主要作用；模型Ⅰ組和中藥Ⅰ組PPARa mRNA表達較正常組明顯升高，且中藥Ⅰ組升高的更為明顯(P值分別為<0.05和<0.01)，Trx mRNA的表達明顯降低，此時PPARα mRNA和Trx mRNA表達的相關分析顯示兩者無相關關系。中藥Ⅰ組大鼠血清和肝組織脂質含量較模型Ⅰ組

8、均有明顯改善，同時反映胰島素抵抗的胰島素敏感指數(shù)也較模型Ⅰ組顯著升高；TNF-α、轉氨酶水平、MDA含量較模型Ⅰ組明顯降低，肝組織PPARα mRNA表達顯著升高(P值分別為<0.01和<0.05)，肝組織脂變程度較模型組明顯減輕(P<0.05)。 13周后，和正常組大鼠相比，模型Ⅱ組大鼠胰島素抵抗程度、血脂和肝臟脂質含量、血清TNF-α含量、轉氨酶水平明顯升高；肝組織MDA含量明顯升高的同時， SOD活力明顯降低，肝組織出現(xiàn)中到重度脂

9、肪變，肝小葉內炎細胞浸潤和散在的點狀壞死，炎癥活動度計分明顯高于正常組(P<0.01)。說明氧應激在肝脂肪變性后進一步發(fā)展為炎癥過程中起到重要作用；同時模型Ⅱ組PPARα mRNA表達較模型Ⅰ組略有下降，但仍高于正常組，且差異無統(tǒng)計學意義(P值>0.05)；肝組織Trx mRNA表達較模型Ⅰ組顯著升高(P<0.01)但仍然低于正常組；此時PPARa mRNA和Trx mRNA表達相關分析表明兩者呈負相關(γ=-0.802，P<0.05)

10、。中藥Ⅱ組大鼠胰島素抵抗及脂質代謝紊亂有明顯改善，血清轉氨酶、TNF-α水平較模型Ⅱ組明顯降低；肝組織MDA含量明顯降低， SOD活力則較模型Ⅱ組顯著升高；此時中藥Ⅱ組PPARα的表達較模型Ⅱ組升高顯著(P值<0.01)；肝組織脂變程度也較模型組明顯減輕(P<0.05)，炎癥活動度也明顯減輕(P<0.01)。 18周后，和正常組大鼠相比，模型Ⅲ組大鼠胰島素抵抗程度血脂和肝臟脂質含量、血清TNF-α含量、轉氨酶水平明顯升高；肝組織

11、MDA含量明顯升高， SOD活力明顯降低；肝組織出現(xiàn)彌漫性脂肪變性及氣球樣變性，其炎癥和壞死程度均較13周末的模型Ⅱ組重，炎癥活動度計分明顯高于正常組(P<0.01)；此時肝組織PPARα mRNA表達較正常組明顯下降(P值<0.01)，Trx mRNA表達較模型Ⅱ組顯著升高(P<0.01)但仍然低于正常組；PPARα mRNA和Trx mRNA表達相關分析表明兩者呈負相關(γ=-0.82，P<0.05)。中藥Ⅲ組大鼠血脂和肝臟脂質含量

12、、血清TNF-α含量、轉氨酶水平較模型組明顯降低；肝組織MDA含量明顯降低， SOD活力、ISI值則較模型組明顯升高；肝組織PPARα mRNA表達明顯升高；肝組織脂變及氣球樣變程度明顯減輕(P<0.01)，炎癥活動度也明顯減輕(P<0.01)。 結論： 1．證實了胰島素抵抗和氧應激/脂質過氧化損傷是NAFLD發(fā)生過程中的兩個關鍵環(huán)節(jié)； 2．PPARα的表達減弱與NAFLD的發(fā)生和發(fā)展關系密切； 3．Tr