1、目的：利用2型登革病毒New Guinea C株(NGC株)重組質?？寺”磉_重組M蛋白和NS1蛋白，制備抗2型登革病毒M蛋白和NS1蛋白的單克隆抗體，并對其生物學特性進行了鑒定，為下一步制備快速檢測登革病毒感染的膠體金試紙條奠定基礎。 方法：誘導表達含DV2 prm、ns1基因的原核表達重組載體pET-32a(+)/prM、pET-32a(+)/M、pQE-30/NS1，并且采用了Ni2+-NTA樹脂親和層析純化重組蛋白，以SD

2、S-PAGE進行初步鑒定，并以兔抗登革病毒免疫血清鑒定其免疫活性。以重組蛋白免疫Balb/c小鼠，采用雜交瘤技術制備抗登革病毒重組蛋白的McAb，采用間接ELISA方法和Western blot進行McAb特異性鑒定；同時采用間接ELISA方法鑒定McAb的lg亞類、效價及親和力進行分析。 結果：重組蛋白pET-32a(+)M、pQE-30/NS1以上清和包涵體表達，用兔抗登革病毒血清檢測發(fā)現(xiàn)上清中蛋白抗原活性強。利用Ni2+-

3、NTA樹脂親和層析方法，從上清中純化蛋白獲得成功。通過雜交瘤技術成功獲得3株可分泌特異性McAb的雜交瘤細胞Ⅲ1.A6，Ⅲ3D2和Ⅲ4C3。其中Ⅲ1A6，Ⅲ4C3的抗體亞類均為IgG1；Ⅲ3D2的抗體亞類為IgG2a。細胞培養(yǎng)上清的效價分別為1:106， 1：105和1:106:3株單抗的親和常數(shù)均在107以上。Westerrl bolt檢測證明3株雜交瘤細胞所分泌的McAb特異性良好。 結論：成功地制備出抗M蛋白的2株McAb