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文檔簡介
1、柞蠶核型多角體病毒(ApNPV)屬昆蟲桿狀病毒,可專一性感染柞蠶。利用這一特點研發(fā)的ApNPV表達載體系統(tǒng)已在柞蠶蛹中成功表達綠色熒光蛋白基因,但尚沒有表達具有生物學活性的蛋白的報道。本實驗首次利用柞蠶核型多角體病毒(ApNPV)表達載體系統(tǒng)分析人生長激素基因(hgh)在柞蠶蛹體中的表達。構建了轉移表達載體pApM748BE/hgh,將轉移表達載體質粒DNA與病毒ApNP V-⊿ph/egfp+基因組DNA共轉染樗蠶(Philosami
2、a cynthiam,Pc)培養(yǎng)細胞Pc-01,用末端稀釋法篩選獲得重組病毒ApNPV-⊿ph/⊿ egfp/hgh+。將該重組病毒感染柞蠶蛹,采用Western-blot和ELISA方法檢測分析人生長激素蛋白(hGH)在柞蠶蛹中的表達,結果顯示:在柞蠶蛹感染重組病毒ApNPV-⊿ph/⊿egfp/hgh+后第7天,hGH就有明顯的表達;感染后13~14天蛹體液中的hGH含量保持較高水平,感染第15天至20天,仍可以檢測到hGH的表達,
3、但表達產(chǎn)物出現(xiàn)降解現(xiàn)象;重組hGH最高表達量可達251.18μg/mL柞蠶蛹體液。
用活化的人紅白血病細胞K562測定重組hGH的體外活性,檢測結果顯示柞蠶蛹表達重組hGH對人紅白血病細胞K562具有明顯的促進增殖作用。對重組hGH進行了初步分離操作,確定重組hGH的最佳硫酸銨鹽析濃度為35%。驗證了利用免疫親和層析從感染了重組柞蠶核型多角體病毒的柞蠶蛹體內分離純化重組hGH的可行性。本實驗利用蠶蛹高效表達有生物活性的hGH,
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