1、目的：骨折愈合即骨折斷端的組織修復反應，包括組織修復與纖維組織轉化為骨組織等過程，是在一系列細胞因子參與調(diào)控下的復雜過程。神經(jīng)系統(tǒng)在骨折愈合中起重要的調(diào)節(jié)作用，神經(jīng)肽在骨折創(chuàng)傷時，由感覺神經(jīng)釋放，參與組織細胞增殖、分化的調(diào)控，血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)是由28個氨基酸組成的神經(jīng)肽，是一種重要的神經(jīng)內(nèi)分泌分子，在周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)有廣泛的分布，作為一種重要神經(jīng)肽參與軟組織創(chuàng)傷和骨折的

2、修復重建。但其影響骨折愈合的機制及與其它調(diào)節(jié)因子間的相互作用仍不是十分清楚。血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial growthfactors，VEGF)是血管內(nèi)皮細胞特異性的絲裂原，能促進血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移，從而增強血管內(nèi)皮細胞通透性，促進新生血管形成，是已被大量實驗證明的能夠促進骨折愈合的重要生長因子之一。有相關文獻報道稱，VIP可使肺癌、前列腺癌等腫瘤細胞合成VEGF，VEGF通過與血管內(nèi)皮細胞膜上的特

3、異性受體結合，刺激血管內(nèi)皮細胞增殖，進而促進腫瘤組織新生血管的形成。本課題通過建立失下牙槽神經(jīng)(inferior alveolar nerve，IAN)下頜骨骨折的動物模型，了解新生骨痂中VIP表達和微血管密度(microvessel density,MVD)的變化規(guī)律，探討在骨折愈合中VIP與骨折斷端新生血管形成、骨痂質量以及骨折愈合速度和方式的關系；通過體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(Human Umbilical Vein vess

4、el Endothelial Cells，HUVECs)，在培養(yǎng)液中加入外源性VIP，觀察HUVECs增殖以及VEGF合成的影響，初步探討VIP在頜骨骨折愈合中的作用及可能機制。 方法： 1．動物實驗： 本試驗改良以往失神經(jīng)及下頜骨骨折模型，每只試驗兔做雙側下頜骨骨折：右側單純下頜骨骨折(35只)；左側IAN橫斷+左側下頜骨骨折(35只)，分別于術后第7、14、21、28、35天各處死7只，制備骨折部位骨痂組織標

5、本，運用組織學和免疫組織化學方法并結合計算機圖像分析系統(tǒng)對兩側骨痂組織愈合質量、愈合方式和速度以及骨痂中VIP的表達和MVD的變化規(guī)律進行檢測和分析。 2．細胞試驗： 為驗證VIP是否具有促進血管內(nèi)皮細胞增殖的作用及其作用機制，我們采用HUVECs細胞系進行體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中加入外源性VIP，應用MTlT法檢測HUVECs的增殖情況，并利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA法)檢測促進血管內(nèi)皮細胞增殖的重要生長因子VEGF的

6、合成。 結果： 動物實驗結果：(1)失IAN骨折側骨痂組織中骨小梁排列稀疏而且不規(guī)則，類骨質及骨吸收空腔較多；單純骨折側骨痂組織中新生骨小梁粗大致密、排列規(guī)則，且生長速度較快。(2)單純骨折側骨折后7天骨痂中即可見到VIP陽性神經(jīng)纖維，14、21、28天在編織骨邊緣有大量的VIP陽性神經(jīng)纖維，35天減少；而失IAN骨折側骨折后7天骨痂中見VIP陽性表達外，以后各時間點骨痂僅有極低水平的VIP表達。(3)單純骨折側骨折后7

7、天八因子相關抗原(factorⅧrelated antigen，fⅧag)呈弱陽性表達，14、21、28天表達明顯增強,35天略減弱，而失IAN骨折側各時相點表達均較單純骨折側弱。 細胞試驗結果：(1)VIP能顯著刺激HUVECs的增殖。(2)VIP對VEGF在HUVECs中的合成具有正調(diào)節(jié)作用。 結論： (1)IAN參與調(diào)控下頜骨骨折的愈合，VIP是參與骨折愈合調(diào)控的重要神經(jīng)肽之一。 (2)骨折部位VIP濃度對

8、骨痂質量有直接影響，失神經(jīng)支配使骨折部位VIP表達顯著減少，使骨痂成熟度降低，同時骨折愈合速度減慢。(3)在骨折愈合的不同階段VIP的表達強弱不同，這種差異對骨折愈合的調(diào)控有重要意義，并且VIP表達強弱與MVD大小變化呈正相關，說明VIP可能促進骨折斷端新生血管的形成。 (4)VIP具有促進HUVECs增殖的作用，并且這種作用可能是通過上調(diào)VEGF在HUVECs的表達來實現(xiàn)。 (5)促進骨折斷端新生血管的形成是VIP參與骨折愈合調(diào)控的機