1、研究背景:經(jīng)頸靜脈肝內(nèi)門腔分流術(shù)(TIPS)為介入性治療肝硬化、門靜脈高壓癥的有效方法.但是,TIPS存在的一個(gè)重要問題就是術(shù)后再狹窄.目前普遍認(rèn)為其再狹窄的基本病理改變與血管支架術(shù)后再狹窄相似,即假性內(nèi)膜的過度增生.假性內(nèi)膜是由表面一層內(nèi)皮細(xì)胞及下方內(nèi)含大量的平滑肌細(xì)胞(SMC)的膠原基質(zhì)所組成,然而,有人發(fā)現(xiàn)TIPS假性內(nèi)膜中的內(nèi)皮細(xì)胞非血管內(nèi)皮細(xì)胞,且SMC的來源與血管平滑肌也有不同.肝星狀細(xì)胞(HSC)活化后在形態(tài)和生物學(xué)功能上

2、與SMC有相似的特征,因此我們推測(cè)HSC在TIPS再狹窄中起重要作用.支架的內(nèi)皮化是維持支架通暢的重要條件,而內(nèi)皮素(Ets)是內(nèi)皮細(xì)胞分泌的重要的多肽,在以上假設(shè)機(jī)制下,內(nèi)皮素對(duì)HSC的作用有待研究.目的:通過離體的細(xì)胞培養(yǎng)研究?jī)?nèi)皮素-1對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞表型改變及增殖的作用,闡明內(nèi)皮素-1在肝損傷不同階段對(duì)HSC的影響,為TIPS術(shù)后分流道再狹窄的形成提供新的理論依據(jù).方法:采用膠原酶、鏈霉蛋白酶灌注法分離大鼠的HSC,用含有0.2％

3、BSA的無血清的DMEM培養(yǎng)液加入內(nèi)皮素-1作用,24小時(shí)后光鏡觀察細(xì)胞表型的變化;原代及傳代培養(yǎng)的HSC用含0.5％或2％的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)24h后,<'3>H-胸苷嘧啶核苷摻入法測(cè)定內(nèi)皮素-1對(duì)肝星狀細(xì)胞DNA合成的效應(yīng).結(jié)果:(1)加入內(nèi)皮素-1培養(yǎng)的HSC,在含0.2％BAS的無血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時(shí)后,細(xì)胞呈"活化"狀態(tài).(2)原代培養(yǎng)的HSC在0.5％的胎牛血清中,內(nèi)皮素-1刺激DNA的合成;在2.0％的胎牛

4、血清中,DNA合成量無明顯差別.(3)傳代培養(yǎng)的HSC在0.5％或2.0％濃度的胎牛血清中,加入不同濃度的內(nèi)皮素-1的DNA合成量明顯降低.結(jié)論:(1)內(nèi)皮素-1對(duì)肝星狀細(xì)胞活化的表型改變具有刺激作用.(2)在早期培養(yǎng)階段,在低濃度的胎牛血清中,內(nèi)皮素-1刺激肝星狀細(xì)胞的增殖,且與內(nèi)皮素的濃度依賴關(guān)系.在較高濃度的胎牛血清中,不同濃度的內(nèi)皮素對(duì)HSC無顯著的刺激或抑制作用.(3)在傳代的肝星狀細(xì)胞高度活化階段,內(nèi)皮素-1顯著地抑制HSC