1、目的:了解重組TNFα刺激下的培養(yǎng)肝臟枯否氏細胞NF-κB活性的時程性變化及不同劑量重組TNFα對枯否氏細胞NF-κB活性的作用規(guī)律,觀察地塞米松對枯否氏細胞NF-κB活性及其調控的細胞因子TNFα的影響,明確NF-κB活性在肝損傷中的作用.方法:原位灌注消化Spraqae-Dawley大鼠肝臟,應用不同離心力獲取肝臟非實質細胞,不連續(xù)密度梯度離心、選擇性貼壁分離肝臟枯否氏細胞,培養(yǎng)、-80℃凍存.取0.5-1.0×10<'7>/ml濃

2、度進行實驗分組,包括對照組6孔,重組TNFα終濃度為10ng/ml刺激,按時點0,0.5小時,1小時,2小時,4小時,6小時,8小時共分7亞組,每組各6孔,不同濃度重組TNFα刺激2小時按0ng/ml,5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,50ng/ml,100ng/ml共6亞組,每組各6孔,10ng/ml亞組預先加入2mg/L地塞米松保護共6孔,重組TNFα10ng/ml刺激2小時組取培養(yǎng)基行TNFαELISA檢測,所有各組收