1、目的:通過構(gòu)建HBX的真核表達載體pcDNA3.1-X，并將其轉(zhuǎn)染人正常肝細胞HL-7702和肝腫瘤細胞HepG2，構(gòu)建表達HBX的HL-7702/HBX和HepG2/HBX細胞模型，為進一步探討HBX在HBV感染和HCC發(fā)生、發(fā)展中的作用搭建新的研究平臺，為HBV感染的治療和相關(guān)肝癌疫苗的設計提供相應的實驗基礎。 方法:通過設計HBX的特異性引物，應用RT-PCR的方法從HepG 2.2.15細胞中獲取HBXcDNA，將其導入

2、真核表達載體pcDNA3.1中，通過PCR、雙酶切鑒定后，選出陽性克隆進行DNA測序鑒定。將構(gòu)建成功的HBX真核表達載體pcDNA3.1-X用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別轉(zhuǎn)染HL-7702細胞和HepG2細胞，G418篩選陽性克隆。以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.1和未轉(zhuǎn)染的細胞作為對照。通過RT-PCR檢測HBXmRNA表達情況；通過Western blot和免疫熒光檢測HBx蛋白表達情況。 結(jié)果:重組質(zhì)粒通過PCR、雙酶切后電泳顯示存在與目的

3、基因大小相同的條帶，DNA測序結(jié)果顯示與Genebank公布的HBX基因序列一致。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后，RT-PCR鑒定顯示，只有轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-X的HL-7702細胞和HepG2細胞有HBXmRNA表達；Western blot和免疫熒光檢測顯示，僅轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-x的HL-7702細胞和HepG2細胞有HBx蛋白表達。 結(jié)論： 1．HBX真核表達載體pcDNA3.1-X構(gòu)建成功。 2．成功建立HBX