1、異槲皮素是一種在植物中分布較廣的黃酮類化合物.異槲皮素在自然界中含量很低,制約了人們對異槲皮素進行研究.利用微生物酶法,以蘆丁為前體物質水解掉一個α-鼠李糖基,即可獲得異槲皮素.本文主要研究微生物sp.R9g產蘆丁-α-鼠李糖苷酶的分離提純,酶反應條件,酶反應性質,以及測定酶蛋白的N-端氨基酸序列.Sp.R9g的發(fā)酵粗酶液經硫酸銨沉淀、透析后,利用DEAE-Cellulose DE52柱(Ф2.0×11.5)進行分離提純,并進一步用Bi

2、o-Rad陽離子交換柱純化,獲得了提純的蘆丁-α-鼠李糖苷酶.使用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,得到單一單點,該酶的分子量約為72kDa.對蘆丁-α-鼠李糖苷酶的酶反應條件進行了研究,其結果為:酶反應的最佳底物濃度為1.0mg/ml,最佳酶反應時間為18個小時,最佳溫度是40℃,最適pH值是5.0.對蘆丁-α-鼠李糖苷酶的底物水解能力進行了研究,結果提純的酶液對底物蘆丁有很高的酶活力,為41.3 U/ml;對底物pNPR和人參皂苷Re的酶

3、活力很低,分別為1.2 U/ml和0.9 U/ml.說明蘆丁-α-鼠李糖苷酶具有專一水解蘆丁的3-C上的1,6-α-鼠李糖苷鍵的特異性,是專一性酶.對蘆丁-α-鼠李糖苷酶做蛋白質電印跡和蛋白質N-端序列進行測定,其N-端的16個氨基酸殘基依次為:Leu/Ser/Ala/Ala/Glu/Trp/Arg/Thr/Gln/Ser/Ile/Tyr/Phe/Leu/Leu/Thr,并測定提純的蘆丁-α-鼠李糖苷酶的蛋白質純度為97％.以這段序列為