1、目的：探討利用腺病毒載體作為炭疽桿菌基因工程疫苗載體的可行性；探索重組腺病毒對霧化的耐受能力；探討腺病毒活載體疫苗霧化吸入免疫途徑的可行性。 方法： 1．PCR擴增PA基因后克隆至質粒pAdTrack-CMV，經(jīng)與pAdeasy一1同源重組，構建重組腺病毒vAd-PA，轉染293細胞，經(jīng)Western．blot檢測表明PA在293細胞中得到表達。 2．重組腺病毒肌肉注射和滴鼻免疫途徑免疫BALB／c小鼠，通過EL

2、ISA和MTT等實驗對免疫鼠的特異性抗體、黏膜免疫反應及細胞免疫應答進行分析。 3．優(yōu)化重組腺病毒霧化條件，選擇最優(yōu)條件霧化免疫小鼠，通過ELISA和MTT等實驗對免疫鼠的特異性抗體、黏膜免疫反應及細胞免疫應答進行分析。 結果： 1．通過酶切鑒定的方法驗證，成功構建了重組腺病毒vAd-PA，并用Western-blot的方法驗證了PA蛋白在細胞內(nèi)的表達。 2．重組腺病毒通過肌肉注射和滴鼻的途徑免疫小鼠，均

3、能誘導特異的體液、黏膜和細胞免疫應答。表現(xiàn)為血清中IgG升高，肺灌洗液中的IgA升高，以及脾細胞培養(yǎng)上清中的細胞因子濃度有所升高，MMT實驗結果顯示T細胞增殖程度高于對照組。 3．重組腺病毒霧化途徑免疫小鼠，可誘導特異的體液、黏膜和細胞免疫應答。表現(xiàn)為血清中IgG升高，肺灌洗液中的IgA升高，MMT實驗結果顯示T細胞增殖程度高于對照組。 結論：炭疽桿菌重組腺病毒基因工程疫苗有望發(fā)展成為一種新型的基因工程疫苗：霧化吸入免疫