耐水濕竹種SSR引物篩選及基于ISSRs標記的耐水濕竹種親緣關系研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、竹類植物是禾本科(Gramineae)竹亞科(Bambusoideae)植物的總稱,是森林資源的重要構成部分。我國南方地區(qū)的沿江灘涂地以及低濕地竹類資源較豐富,這些耐水濕竹類對于土地資源的利用、調整當地農村產業(yè)結構以及改善當地的生態(tài)環(huán)境具有重要的作用,但一些竹種之間的親緣關系尚存在爭議,影響了一些竹種的科學和有效的利用。本論文主要對剛竹屬、苦竹屬和箬竹屬共3個屬11個耐水濕竹種進行了兩方面的研究:(1)耐水濕竹種SSR-PCR反應體系的

2、建立和優(yōu)化及SSR引物篩選;(2)基于ISSRs的耐水濕竹種的遺傳多樣性及親緣關系研究。
  研究結果如下:
  1.采用正交試驗設計和單因素分析方法建立和優(yōu)化了耐水濕竹種SSR-PCR反應體系,篩選了SSR引物。反應體系總體積為20.0μL:模板DNA(5-10 ng·μL-1)1.1μL、dNTP(10 mmol·L-1)0.44μL、正反向引物(10μmol·L-1)0.26μL、Mg2+(25 mmol·L-1)2.

3、0μL、Taq DNA聚合酶(5 U·μL-1)0.8μL、10×PCR緩沖液2.0μL、HPLC超純水13.14μL。 PCR擴增程序為:94℃預變性3 min;44個循環(huán):94℃變性30 sec,54.0~56℃退火30 sec,72℃延伸60 sec;最后72℃延伸3min。同時,實驗顯示了SSR標記在不同竹種間有限的通用性。
  2.建立了耐水濕竹種ISSR-PCR最適反應體系,利用優(yōu)化后的ISSR-PCR反應體系篩選出了

4、11條多態(tài)性好、譜帶清晰、穩(wěn)定性好的引物,并運用這些ISSR引物分析了耐水濕竹種的遺傳多樣性和親緣關系。結果顯示了這些耐水濕竹種有較高的遺傳多樣性,與其表型特征的多態(tài)性相符?;贒ice相似性系數的UPGMA聚類分析可將本研究中的11個竹種明顯地區(qū)分開來,并且將其清晰地歸入3個組,且與剛竹屬、苦竹屬和箬竹屬相對應。聚類分析結果部分地支持了傳統的形態(tài)學分類結果,但顯示斑苦竹與剛竹屬親緣關系較箬竹更近。本研究還初步發(fā)現一些竹屬的ISSR特異

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