1、小鼠模型被廣泛應用于卵巢始基卵泡激活(初始募集)基本規(guī)律及各種生長分化因子調控作用的研究中。離開體內的自然環(huán)境,卵巢必須適應環(huán)境的改變,比如二氧化碳濃度、營養(yǎng)供給、溫度及酸堿度。更重要的是,離開體內調節(jié)系統(tǒng)卵泡的生長會發(fā)生改變。近幾年,卵巢的孵育方法主要包括體外培養(yǎng)和腎被膜下移植。但沒有文獻報道不同孵育體系對卵巢發(fā)育的影響,及孵育卵巢和在體卵巢間卵泡發(fā)育的區(qū)別。在本研究中,我們比較了體外培養(yǎng)卵巢、移植卵巢及體內生長卵巢中各級卵泡的數(shù)量。

2、用免疫組化技術和半定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測三個重要基因的表達及蛋白定位,包括透明體蛋白3(ZP3)、生長分化因子9(GDF-9)和抗苗勒氏管激素(AMH)。結果顯示,體外培養(yǎng)加速卵泡激活、延緩發(fā)育卵泡的生長,影響ZP3、GDF-9和AMH蛋白的表達模式。盡管移植造成少量始基卵泡的丟失,但移植卵巢的特征與體內生長卵巢非常相似,這一結果提示移植可以提供最佳的卵泡孵育環(huán)境。在體外培養(yǎng)體系中,alpha-Modifie Eag

3、le Medium(α-MEM)是較好的基礎培養(yǎng)基。本實驗系統(tǒng)研究了孵育卵巢與體內生長卵巢間的相同及不同,證明了移植可以最好的模擬體內卵巢生長環(huán)境。
　　【目的】探討microRNA-145(miR-145)對小鼠顆粒細胞增殖、分化和甾體激素合成的調節(jié)作用及機制。
　　【方法】選擇3周齡未性成熟小鼠卵巢,用原位雜交技術檢測miR-145的表達。應用機械法獲取3周齡小鼠卵巢竇狀卵泡中的顆粒細胞進行體外培養(yǎng)。用半定量逆轉錄聚合酶

4、鏈反應(RT-PCR)檢測顆粒細胞中miR-145、分化相關基因及激素合成酶mRNA的表達。胸腺嘧啶核苷類似物(EdU)方法檢測顆粒細胞增殖。用免疫組織化學法檢測顆粒細胞分化關鍵基因蛋白的表達。
　　【結果】miR-145在小鼠卵巢竇狀卵泡的顆粒細胞中高表達,始基卵泡、初級卵泡、次級卵泡及卵巢間質中未見明顯表達。在體外培養(yǎng)顆粒細胞中,miR-145的表達受卵泡刺激素(FSH)的調節(jié)。下調miR-145可顯著抑制顆粒細胞的增殖、分化