1、背景：
　　 糖尿病腎病(diabeticnephropathy，DN)是最常見的糖尿病微血管并發(fā)癥，而且現(xiàn)在已經(jīng)成為導致終末腎臟病(end-stagerenaldisease，ESRD)首位病因，大量的DN患者每年需要花費巨額的醫(yī)療費用，給社會和家庭帶來了極大的負擔。因而對糖尿病腎病(DN)的早期治療、早期干預有著十分重要的意義。在DN中足細胞的損傷對蛋白尿的發(fā)生和發(fā)展有很大的關系，而蛋白尿會造成DN的加重，最終發(fā)展成為ESR

2、D。因而越來越多學者將DN認為是一種“足細胞病”。一些文獻和我們前期的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了，高糖刺激下會導致足細胞發(fā)生上皮細胞向間充質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)分化(EMT)。
　　 糖原合成酶激酶3β(glycogensynthasekinase3β，GSK-3β)是細胞轉(zhuǎn)分化信號通路重要的調(diào)控因子，在通路中起著承上啟下的重要作用，影響了上皮細胞的轉(zhuǎn)分化過程。β-catenin、snail作為轉(zhuǎn)分化通路Wnt通路中關鍵的信號分子，通過影響下游靶基因的

3、表達，參與了細胞的增殖、分化、凋亡過程，影響了細胞的生物學特性。在高糖導致的足細胞的轉(zhuǎn)分化過程中，β-catenin和snail是否參與其中，GSK-3β和β-catenin、snail的關系，目前尚未見文獻報道。
　　 目的：
　　 通過影響足細胞中GSK-3β表達后，觀察β-catenin、snail表達量的改變，以及β-catenin、snail和GSK-3β的相互關系，旨在探討β-catenin和snail是否參

4、與了高糖環(huán)境下足細胞的轉(zhuǎn)分化過程，以及在高糖導致的足細胞的轉(zhuǎn)分化過程中，GSK-3β和β-catenin和snail的關系。以求為DN的發(fā)病機制及治療的新的方法提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 以條件永生系小鼠足細胞(MPC-5)為研究對象
　　 1.按不同的葡萄糖濃度分組:正常組(LG):葡萄糖5.6mmol/L;高糖刺激組(HG):葡萄糖濃度分別為12.5mmol/L(12.5HG)、25mmol/L(25

5、HG)、50mmol/L(50HG);高滲對照組(LG+M):葡萄糖5.6mmol/L+D-甘露醇19.4mmol/L。采用RT-PCR和GSK-3β激酶活性試劑盒，檢測GSK-3βmRNA表達量和其激酶活性的變化，采用RT-PCR和westernblot分別從蛋白和mRNA水平檢測通路蛋白β-catenin、snail、VDR(維生素D受體)的表達量的變化。
　　 2.干擾或抑制GSK-3β表達后，采用RT-PCR和weste

6、rnblot分別從蛋白和mRNA水平檢測通路蛋白β-catenin、snail的表達量的變化。
　　 3.按不同葡萄糖濃度分組:正常組(LG):葡萄糖5.6mmol/L;高糖刺激組(HG):葡萄糖25mmol/L。用免疫熒光方法檢測GSK-3β和β-catenin，β-catenin和VDR的表達量和細胞定位的改變，并用免疫熒光共定位法檢測其相互關系。
　　 結(jié)果：
　　 1.RT-PCR和GSK-3β激酶活性試

7、劑盒結(jié)果顯示:隨著糖濃度的升高，足細胞GSK-3β的mRNA的表達量逐漸增多，且足細胞GSK-3β激酶活性逐漸升高，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。RT-PCR和westernblot結(jié)果顯示:發(fā)現(xiàn)隨著糖濃度的升高，β-catenin、snail的mRNA及蛋白的表達量逐漸升高，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.RT-PCR和westernblot結(jié)果顯示:下調(diào)GSK-3β表達后，β-catenin、sna

8、il的mRNA及蛋白的表達量較高糖組降低，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 3.免疫熒光結(jié)果顯示:高糖環(huán)境下GSK-3β和β-catenin的表達量較正常組增多，且在高糖影響下β-catenin發(fā)生了向細胞核的轉(zhuǎn)移，免疫熒光共定位發(fā)現(xiàn)，高糖影響下GSK-3β和β-catenin較正常組沒有完全重疊，推測在高糖影響下的足細胞中β-catenin可能并不是僅通過GSK-3β調(diào)控其表達。
　　 4.免疫熒光結(jié)果顯示

9、:β-catenin和VDR(維生素D受體)在高糖和正常組免疫熒光共定位均存在細胞內(nèi)定位的重疊。RT-PCR和westernblot結(jié)果顯示:發(fā)現(xiàn)隨著糖濃度的升高，VDR的mRNA及蛋白的表達量逐漸降低，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。推測VDR可能參與了高糖影響下的足細胞中對β-catenin的調(diào)控影響。
　　 結(jié)論：
　　 1.GSK-3β、轉(zhuǎn)分化信號分子β-catenin和snail參與高糖誘導的足細胞向間充