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文檔簡介
1、目的:探討c-jun基因在大鼠潰瘍性結腸炎(UC)中的表達變化及應用RNA干擾(RNAi)技術初步尋找維藥西帕依潰結安治療UC的可能作用靶點。方法:1.采用DNCB(2,4-二硝基氯苯)復合乙酸灌腸的方法復制大鼠潰瘍性結腸炎模型,將動物隨機分為正常組、潰瘍性結腸炎模型組、維藥西帕依潰結安干預組、5-氨基水楊酸(5-ASA)陽性對照組和生理鹽水陰性對照組,采用半定量逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)和Western blot方法檢測各組
2、大鼠結腸組織中c-jun的表達變化;2.構建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO/c-jun及pSilencer-c-Jun干擾載體,將二者共轉染COS-7細胞,倒置熒光顯微鏡下觀察結果,同時用Western blot方法檢測GFP蛋白表達。結果:1.在mRNA水平:各組間c-jun的表達無統(tǒng)計學意義(P=0.071)。在蛋白質水平:模型組中c-Jun的表達高于正常組,差異有統(tǒng)計學差異(P<0.05),潰結安干預組中c-Jun的表達
3、低于模型組,差異有統(tǒng)計學差異(P<0.05),潰結安干預組與生理鹽水組之間c-Jun的表達有統(tǒng)計學差異(P<0.05);2.成功構建了pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO/c-jun及pSilencer-c-Jun干擾載體,在倒置熒光顯微鏡下可見綠色熒光蛋白,且找到了有效的siRNA,經(jīng)Western blot方法檢測GFP蛋白的表達明顯降低。結論:1.c-jun基因可能參與了潰瘍性結腸炎的發(fā)生發(fā)展,且c-jun基因可能是維藥西帕依
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