黃瓜花葉病毒運(yùn)動(dòng)蛋白與微絲作用關(guān)系及胞間連絲通透性調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本文探討了黃瓜花葉病毒運(yùn)動(dòng)蛋白(CMVMP)與微絲的作用關(guān)系及通過(guò)作用于微絲對(duì)胞間連絲的調(diào)控機(jī)制?! ”疚睦么竽c桿菌體外表達(dá)黃瓜花葉病毒運(yùn)動(dòng)蛋白,從包含體中提純并獲得了有一定活性的CMVMP,同時(shí)純化了兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白;利用免疫印跡,共沉淀和熒光觀察,證明了CMVMP與肌動(dòng)蛋白及微絲的結(jié)合活性。同時(shí)證明它在微絲聚合溶液中能夠形成二聚體和聚集體,這種二聚體的形成可能與ATP有關(guān)。運(yùn)用共沉淀結(jié)合熒光光度法,電鏡,光鏡觀察證明CMVMP對(duì)

2、肌動(dòng)蛋白聚合過(guò)程的影響與CMVMP濃度有關(guān),低濃度CMVMP降低Actin聚合臨界濃度,促進(jìn)聚合;高濃度CMVMP提高Actin聚合的臨界濃度,抑制聚合。直接的觀察結(jié)果顯示低濃度CMVMP作用下,呈現(xiàn)的微絲有許多短片段出現(xiàn),高濃度CMVMP作用下,呈現(xiàn)的微絲基本上呈點(diǎn)狀,說(shuō)明CMVMP不影響Actin成核甚至有助于成核,但抑制微絲的延伸。進(jìn)一步的觀察證明CMVMP對(duì)微絲的作用主要是切割作用。這種作用同樣與CMVMP作用濃度有關(guān),低濃度C

3、MVMP對(duì)微絲的作用不明顯而高濃度CMVMP對(duì)微絲有明顯的切割作用。隨著CMVMP反應(yīng)濃度的增加,在熒光顯微鏡和電鏡下看到的微絲越來(lái)越短,在溶液中CMVMP與Actin摩爾比達(dá)到1:1以上時(shí)微絲均為很小的片斷而呈點(diǎn)狀結(jié)構(gòu),觀察不到較長(zhǎng)的微絲片斷;而熒光光度法測(cè)定的結(jié)果表明,隨CMVMP濃度增加而熒光曲線只是稍有下降,說(shuō)明微絲的總量并未發(fā)生明顯的變化,因此我們推證看到的短微絲片段主要是由CMVMP的切割效應(yīng)造成的。CMVMP對(duì)微絲的破壞作

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