1、背景介紹：椎間盤退變(intervertebral disc degeneration，IDD)導致的腰椎間盤突出癥和慢性腰腿痛是骨科常見疾患，其具體機制不明。臨床上常采用手術切除突出椎間盤組織或行椎體間融合術等以緩解癥狀，但術中不可避免地會破壞椎間盤和椎體附件的正常結構，引起繼發(fā)的脊柱不穩(wěn)或加速相鄰椎間盤的退變，所以其遠期療效并不理想。組織工程學的發(fā)展為解決這一難題提供了一種新的選擇，通過組織工程學的方法修復或復建退變椎間盤組織是目前

2、國內外進行的一項熱點研究工作。Nishimura等發(fā)現(xiàn)通過早期移植自體髓核細胞可減緩甚至有逆轉IDD發(fā)生的可能。髓核是乏細胞組織，而且髓核細胞體外培養(yǎng)表現(xiàn)出增殖緩慢，因此如何在體外培養(yǎng)時促進髓核細胞增殖并維持其表型成為細胞移植治療研究IDD首先要解決的問題。 骨髓間充質干細胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓內除造血干細胞(hematopoietic ste

3、m cells，HSCs)之外的另一類干細胞，是骨髓造血微環(huán)境的重要組成部分，由于它們來自骨髓的支持結構，并作為滋養(yǎng)層支持造血干細胞的生長，因此也被稱為骨基質細胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。隨著組織工程學的發(fā)展，bMSCs作為一種具有多種分化潛能的種子細胞越來越受到人們的關注和研究。但實際上，人們認識bMSCs的功能是從對造血組織的支持和調控造血的作用開始的，近年來研究發(fā)現(xiàn)該類細胞在體內、外對共培養(yǎng)

4、的其它組織和細胞也有支持和輔助作用。 纖維環(huán)及移行區(qū)的組織均來源于間充質，采用比纖維環(huán)分化更早期的間充質干細胞與髓核細胞共培養(yǎng)理論上也存在上調髓核細胞活性的可能，本研究擬通過建立共培養(yǎng)模型探討骨髓間充質干細胞對髓核細胞活性的影響。 目的：建立髓核細胞與骨髓間充質干細胞共培養(yǎng)的模型，研究體外共培養(yǎng)條件下骨髓間充質干細胞對髓核細胞活性的影響，以探討一種在體外培養(yǎng)條件下安全、簡便的提高髓核細胞的活性方法。 方法：將術中

5、取獲取的成人骨髓標本分離出bMSCs經(jīng)過傳代、純化、取P<,3>代bMSCs按每孔1×10<'4>接種于transwell插入式共培養(yǎng)皿(6孔板)底層，共12孔；再將術中獲取的成人髓核標本分離出髓核細胞，按每孔1×10<'4>接種于共培養(yǎng)皿上層，重復12孔作為實驗組；另按1×10<'4>接種髓核細胞于普通6孔培養(yǎng)板，重復12孔作為對照組。培養(yǎng)過程中觀察共培養(yǎng)條件下髓核細胞形態(tài)變化，待共培養(yǎng)皿中髓核細胞融合后，分別計數(shù)實驗組與對照組中髓核

6、細胞，同時用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法檢測培養(yǎng)上清液中蛋白多糖含量變化，并進行比較。 結果：經(jīng)過共培養(yǎng)后8天實驗組中的髓核細胞達到90％融合，而對照組中的髓核細胞只在局部有少量融合，大部分細胞仍然呈散在分布。細胞計數(shù)顯示實驗組髓核細胞的增殖速度及ELISA法測定的實驗組蛋白多糖合成均較對照組明顯提高(P<0.01)。 結論：成功建立骨髓間充質