1、阿片類藥物是臨床最常用、最有效的鎮(zhèn)痛藥物，但在應用中可伴隨嚴重的副作用。椎管內給藥具有用量小、不良反應發(fā)生率低、鎮(zhèn)痛作用持久的優(yōu)點，卻易引發(fā)阿片耐受。目前，尋找可強化阿片類藥物鎮(zhèn)痛作用，減少其用量及降低不良反應的新型輔助藥物已經成為研究的熱點。胍丁胺(agmatine，AG)是咪唑啉受體(imidazoline receptor，IR)的內源性配體，廣泛存在于中樞神經系統(tǒng)內，作用于咪唑啉受體和α2腎上腺素受體，并可能在受體后與阿片、NM

2、DA受體間相互作用，被認為是一種新的神經遞質和/或神經調質。研究表明胍丁胺可以顯著提高阿片類藥物的鎮(zhèn)痛作用，還能有效地預防和治療嗎啡的耐受和依賴；還可能通過作用于咪唑啉受體參與某些神經遞質(如兒茶酚胺)和激素的釋放，產生降低血糖和利尿等多種生物學效應；從而拮抗疼痛所引起的高血壓、高血糖等應激反應。目前椎管內應用胍丁胺強化阿片類藥物鎮(zhèn)痛，減輕嗎啡耐受和依賴尚缺乏系統(tǒng)性的研究。因此，本課題擬通過在體和離體兩部分實驗探討胍丁胺作為椎管內阿片類

3、藥物輔助藥的可行性：
　　實驗一觀察胍丁胺對原代培養(yǎng)脊髓神經元的毒性作用及對谷氨酸(glutamate，Glu)損傷后神經元的影響。采用原代細胞培養(yǎng)法，分離培養(yǎng)胚胎大鼠脊髓神經元，3d后加入不同濃度的AG(0.5～80μg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)12h、24h和36h，接著采用四甲基氮唑藍法和中性紅法分別測定胍丁胺對細胞存活率以及毒性的影響。另外在加入AG的同時給予2mmol/LGlu對細胞進行損傷，建立體外神經元損傷模型，然后進行細胞形

4、態(tài)學觀察、β-tubulinⅢ免疫細胞化學染色、四甲基氮唑藍法測定細胞存活率、Hoechst33342和PI染色檢測細胞凋亡和壞死率，同時檢測神經元中丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的變化。結果發(fā)現，AG濃度低于40μg/ml時對正常培養(yǎng)脊髓神經元的存活沒有影響，當AG達到80μg/ml后，神經元生長受到一定影響；給予Glu損傷后，神經元細胞生長狀態(tài)較差，出現退化，而且細胞存活率顯著下降，壞死和凋亡率顯著增高(P＜0

5、.05或0.01)，給予AG干預(AG-Glu組)細胞生長顯著優(yōu)于Glu組，且細胞凋亡和壞死率降低，細胞存活率增高，MDA含量減少(P＜0.05)。提示AG作為一種新型神經遞質或調質，在對正常生理情況下神經元的生長沒有毒副作用，而在Glu誘導損傷條件下，能抑制Glu誘導的損傷；其發(fā)生機制可能與AG通過拮抗N-甲基-M-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體，阻斷或抑制Glu的氧化毒性的級鏈反應有關。
　

6、　實驗二觀察脊髓水平給予胍丁胺對鞘內嗎啡鎮(zhèn)痛作用的影響。30只SD大鼠隨機分為3組，每組10只。C1組：鞘內注射生理鹽水10μl；M1組：鞘內注射嗎啡(15μg/10μl)；AM1組：鞘內同時給予嗎啡15μg+胍丁胺12.5μg/10μl。所有大鼠均于鞘內給藥后5min于跖部皮下注射蜜蜂毒50ul(0.2mg)致痛，觀察并紀錄1h內大鼠的自發(fā)縮足反射次數。結果發(fā)現：與C1組比較，M1組(嗎啡組)1h內大鼠的自發(fā)縮足反射次數顯著減少，提示

7、鞘內注射嗎啡對蜜蜂毒誘致的自發(fā)痛具有顯著性抑制作用(P＜0.05)；鞘內同時給予嗎啡和胍丁胺(AM1組)，大鼠自發(fā)縮足反射次數進一步減少，與M1組比較具有顯著性意義(P＜0.05)，提示鞘內胍丁胺和嗎啡聯合用藥可顯著增強嗎啡對蜜蜂毒誘致自發(fā)痛的抑制作用，具有協(xié)同效應。
　　實驗三觀察胍丁胺對鞘內嗎啡耐受的翻轉效應。24只SD大鼠隨機分為3組，每組8只。C2組：生理鹽水對照組；M2組：嗎啡耐受組，鞘內注射15μg嗎啡5μl+0.9％

8、氯化鈉注射液10μl連續(xù)4天；AM2組：嗎啡耐受＋胍丁胺組，鞘內注射15μg嗎啡5μl+0.9％氯化鈉注射液10μl每天兩次，連續(xù)3天后，第四天鞘內注射15μg嗎啡5μl+12.5μg胍丁胺10μl。所有大鼠均于每次給藥后10min后檢測大鼠熱刺激潛伏期和機械刺激閾值。另取24只SD大鼠分組和前3天處理同上，在第4天鞘內注射藥物5min后，于跖部皮下注射蜜蜂毒50μl(0.2mg)致痛，觀察并紀錄1h內大鼠的自發(fā)縮足反射次數。結果：與對

9、照組比較，鞘內嗎啡可顯著提高正常大鼠熱刺激潛伏期和機械刺激閾值(P＜0.05)；連續(xù)注射嗎啡三天后，嗎啡(M2組)提高痛閾的效應消失，熱刺激潛伏期和機械刺激閾值基本正常，與對照組比較無顯著性差異(P﹥0.05)，提示嗎啡耐受形成；第4天胍丁胺和嗎啡聯合用藥(AM2組)后，嗎啡耐受大鼠已降低的熱和機械刺激閾值又明顯升高，與嗎啡組(M2)和第3天給藥后比較均有顯著性差異(P＜0.05)；同樣，胍丁胺和嗎啡聯合用藥組對蜜蜂毒誘致自發(fā)痛的抑制作