1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文鼻咽癌細胞肝轉(zhuǎn)移亞群的篩選及基因表達譜分析姓名：韓春申請學位級別：碩士專業(yè)：病理與病理生理學指導教師：姚開泰20060603中文摘要檢測基因表達水平的新技術。它具有靈敏度高、檢測量大等優(yōu)點，可同時檢測成千上萬個基因的表達情況或平行對比這些基因在不同樣本中的表達，被認為是一種高通量檢測基因表達水平的方法。因此，基因芯片技術可以成為探討腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機制的主要手段。腫瘤細胞原位移植技術的出現(xiàn)，極大的推動了腫瘤動物模型

2、的發(fā)展。將人類腫瘤組織或腫瘤細胞原位種植到免疫缺陷的動物體內(nèi)，能夠很好的模擬腫瘤在體內(nèi)的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移過程，復制出與患者十分接近的臨床特征，為研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及開展實驗性的治療干預，提供了良好的研究對象。近年來新興的腫瘤分子成像技術，使人們能夠在活體動物體內(nèi)觀察腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程，提高人們對微小腫瘤和腫瘤微轉(zhuǎn)移的認識。綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)廣泛應用于可視化動物模型的研究，使得人

3、們可以在活體狀態(tài)下觀察腫瘤的演進規(guī)律，極大地推動了腫瘤的早期生長、發(fā)展規(guī)律的研究，有效的彌補了人體腫瘤僅能通過活檢、手術標本和尸檢等進行分析的不足。本實驗通過對已標記GFP的人鼻咽癌高轉(zhuǎn)移細胞株5—8F—EGFP進行裸鼠體內(nèi)連續(xù)傳代，人為地施加選擇壓力，成功的建立了人鼻咽癌細胞肝轉(zhuǎn)移亞群5—8F—H3B—EGFP。通過體內(nèi)體外實驗證明其轉(zhuǎn)移能力明顯高于母系，并且有明顯的肝轉(zhuǎn)移傾向。我們利用基因芯片技術比較了兩株細胞5—8F—EGFP和5

4、—8F—H3B—EGFP的基因表達譜差異(每株細胞重復3次)，通過統(tǒng)計學分析，獲得了337個表達差異兩倍以上的基因。對這281個差異表達基因進行生物學功能分類、文獻調(diào)研以及基因功能分析，找到了16個與腫瘤肝轉(zhuǎn)移相關的基因。通過聚類分析發(fā)現(xiàn)，這16個基因能夠很好的區(qū)分人鼻咽癌高轉(zhuǎn)移細胞株5—8F—EGFP和人鼻咽癌細胞肝轉(zhuǎn)移亞群5—8F—H3B—EGFP?，F(xiàn)簡述如下：一利用裸鼠脾臟注射人鼻咽癌高轉(zhuǎn)移細胞株5—8F—EGFP，獲得鼻咽癌肝轉(zhuǎn)