1、蘇云金芽胞桿菌幕蟲(chóng)亞種(Bacillusthuringiensissubsp.finitimus)能形成兩種伴胞晶體。當(dāng)芽胞形成細(xì)胞裂解后，一種晶體被釋放出來(lái)，形成自由的伴胞晶體，另一種則始終和芽胞粘連在一起。電鏡結(jié)果顯示該晶體在芽胞外壁內(nèi)側(cè)形成，成熟后被包裹在芽胞外壁以內(nèi)不脫落。我室分離的對(duì)北方根結(jié)線蟲(chóng)有毒力的蘇云金桿菌020菌株也具有這一特殊現(xiàn)象。脈沖電泳和蛋白質(zhì)SDS-PAGAE電泳顯示020菌株和幕蟲(chóng)亞種標(biāo)準(zhǔn)血清型菌株T02有相

2、同的質(zhì)粒組成，伴胞品體蛋白大小亦相同。 蘇云金桿菌幕蟲(chóng)亞種不但具有品胞粘連的特殊現(xiàn)象，還具有獨(dú)特的殺蟲(chóng)譜帶?？赡苁且?yàn)檠堪诶ハx(chóng)腸道內(nèi)再次萌發(fā)，產(chǎn)生了其他致病因子，如腸毒素、溶血素等，與殺蟲(chóng)晶體蛋白協(xié)同作用；也可能是因?yàn)榘榘w受到疏水的芽胞外壁層保護(hù)而能在水中等一般伴胞晶體不容易存在的地方被易感昆蟲(chóng)攝食。因此，根據(jù)蘇云金桿菌晶胞粘連原理構(gòu)建“生物囊”殺蟲(chóng)制劑具有很高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。將它和其他殺蟲(chóng)晶體蛋白結(jié)合起來(lái)，不但可以構(gòu)建廣

3、譜高效的殺蟲(chóng)工程菌，還可以利用芽胞保護(hù)伴胞晶體，減少輻射、干旱或生產(chǎn)對(duì)晶體毒力的影響。此外研究cry基因的起源和調(diào)控也是目前國(guó)際上的熱點(diǎn)領(lǐng)域。 本實(shí)驗(yàn)根據(jù)已發(fā)表的cry26Aal和cry28Aal基因序列設(shè)計(jì)引物，從蘇云金芽胞桿菌020菌株中克隆到cry26Aa和cry28Aa基因，通過(guò)穿梭載體將這兩個(gè)基因分別和同時(shí)轉(zhuǎn)化到蘇云金芽胞桿菌無(wú)晶體突變株BMB171中。透射電鏡下觀察到cry26和cry28基因同時(shí)表達(dá)在芽胞外壁內(nèi)側(cè)和

4、外側(cè)都可形成內(nèi)含體。而當(dāng)兩個(gè)cry基因單獨(dú)存在時(shí)，cry26基因表達(dá)合成的內(nèi)含體位置不確定，大部分在芽胞外壁外側(cè)形成，少數(shù)在芽胞外壁內(nèi)側(cè)形成；而cry28基因則只在芽胞外壁外側(cè)表達(dá)合成內(nèi)含體。同時(shí)PAGE膠檢測(cè)和鏡檢結(jié)果顯示兩個(gè)基因表達(dá)的蛋白都不穩(wěn)定，極易降解。 同時(shí)蘇云金桿菌020菌株形成的自由伴胞晶體也很不穩(wěn)定，難以檢測(cè)。對(duì)020菌株總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，顯示該菌株含有S-層蛋白N-端保守區(qū)和S-層蛋白基因上游csaAB操