1、本文主要探索臍血單個(gè)核細(xì)胞移植后在大鼠心臟梗死周邊區(qū)促新生血管作用以及VEGF-A的表達(dá)變化，并相應(yīng)地觀察急性心肌梗死大鼠心功能的改變。同時(shí)，本研究也驗(yàn)證了臍血單個(gè)核細(xì)胞作為干細(xì)胞治療的一種重要細(xì)胞來源的可行性和相應(yīng)優(yōu)點(diǎn)。 研究目的： 1.研究急性心肌梗死大鼠在人臍血單個(gè)核細(xì)胞移植后心臟梗死周邊區(qū)毛細(xì)血管增生的改變。 2.研究臍血單個(gè)核細(xì)胞移植后大鼠心臟VEGF的表達(dá)變化及特點(diǎn)。 3.研究人臍血單個(gè)核細(xì)胞

2、移植對(duì)急性心肌梗死大鼠與心功能改善的作用及其應(yīng)用于急性心肌梗死的可行性。 研究材料與方法： 1.30份臍血均來自中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科，經(jīng)6％羥乙基淀粉(賀斯)及1.077g/1ficoll-paque分離液分離出臍血單個(gè)核細(xì)胞。CD34陽性細(xì)胞是較原始的細(xì)胞，能向多種成熟細(xì)胞分化，包括心肌細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞等，移植前用流式細(xì)胞儀分析CD34陽性細(xì)胞含量。另外，為明確移植細(xì)胞的去向，移植前用BrdU標(biāo)記細(xì)胞，Brd

3、U可以代替胸腺嘧啶在DNA合成期攝取，整合到分裂細(xì)胞DNA中，移植后用抗BrdU免疫組化染色檢測。 2.Wistar雄性大鼠75只(購自中山大學(xué)動(dòng)物中心)隨機(jī)分為：移植組(急性心肌梗死+細(xì)胞移植)30只、對(duì)照組(急性心肌梗死)30只和假手術(shù)組15只。按開胸結(jié)扎前降支近段的方法建立急性心肌梗死模型，移植組梗死周邊區(qū)心肌內(nèi)注入臍血單個(gè)核細(xì)胞2×105/μL，對(duì)照組同一部位注入等量培養(yǎng)基，假手術(shù)組開胸，穿針過線，不結(jié)扎。 3.

4、移植后4周用左心導(dǎo)管及多導(dǎo)生理記錄議進(jìn)行心功能檢測，以及用免疫組化方法行心臟梗死周邊區(qū)毛細(xì)血管密度測定及BrdU陽性細(xì)胞檢測；在移植后第4天，第7天，第14天，第28天分別對(duì)對(duì)照組和移植組取材用RT-PCR法進(jìn)行VEGF的mRNA表達(dá)半定量分析。對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.血流動(dòng)力學(xué)檢測顯示：與對(duì)照組相比，移植組LVEDP和HR顯著下降(P＜0.05)，±dp/dtmax則明顯增快(P＜0.05)，均提示移植

5、組大鼠心功能得到改善。 2.免疫組化染色結(jié)果可見：移植組有BrdU陽性細(xì)胞存在，提示臍血單個(gè)核細(xì)胞在移植區(qū)存活；抗Ⅷ因子免疫組化染色示梗死周邊區(qū)平均血管密度(a-MVD)明顯增加，移植組為6.6±0.6個(gè)/HP，對(duì)照組為2.9±0.4個(gè)/HP，兩組比較差異有顯著性(P＜0.01)。 3.對(duì)照組和移植組大鼠心肌以表達(dá)VEGF164和VEGF188為主，VEGF120均呈微弱表達(dá)。移植組VEGF164和VEGF188表達(dá)于第

6、7天明顯增加，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，并持續(xù)表達(dá)至28天。對(duì)照組于第14天和第28天已基本不表達(dá)。 結(jié)論： 1.人臍血單個(gè)核細(xì)胞移植于急性心肌梗死大鼠后有臍血干細(xì)胞存活，并且證實(shí)了移植組心功能較對(duì)照組明顯改善。從而可見臍血單個(gè)核細(xì)胞移植應(yīng)用于治療急性心肌梗死的可行性。 2.急性心肌梗死大鼠在人臍血單個(gè)核細(xì)胞移植后毛細(xì)血管增生得到促進(jìn)，并伴有心功能的改善，提示毛細(xì)血管增生可能是心功能改善的重