小麥黃花葉病毒致病性分化及CI基因序列分析與原核表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、利用小麥黃花葉病毒(WYMV)提純病毒作為抗原,免疫豚鼠制備特異性的WYMV豚鼠抗血清,采用微量沉淀法及免疫雙擴(kuò)散測(cè)定其效價(jià)為2<'7>.建立了以豚鼠抗血清為誘捕抗體、以兔抗血清為檢測(cè)抗體的異種動(dòng)物雙抗夾心法檢測(cè)WYMV的實(shí)驗(yàn)方法.選擇有代表性的小麥品種或育種材料26份,并從日本和美國(guó)收集到用于區(qū)分株系材料6份,在河南潢川、湖北羅田、四川雅安、江蘇揚(yáng)州四地進(jìn)行致病性分化田間試驗(yàn),根據(jù)品種的反應(yīng),并結(jié)合ELISA、RT-PCR、Weste

2、rn-blotting等方法進(jìn)行致病性分化檢測(cè).通過(guò)RT-PCR,獲得了WYMV湖北羅田分離物細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含體蛋白(CI,cylindrical inclusion protein gene)基因的cDNA克隆.將含有WYMV CI基因的重組質(zhì)粒經(jīng)NdeI和EcoRI酶切、克隆到pET-28a(+)上,構(gòu)建了原核表達(dá)載體pETCIb,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)出37kDa蛋白.純化表達(dá)產(chǎn)物后,免疫家兔制備抗血清.經(jīng)

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