1、鯉魚是我國重要的水產經濟動物，黃河鯉魚是鯉魚中的一個重要的地方品種。近年來，由于人類活動因素的影響，如過度捕撈，濫捕濫殺，河流污染，天然繁殖基地被隔離以及黃河自然斷流等，這些因素嚴重破壞著黃河流域的生態(tài)平衡，使得黃河鯉魚的資源總量急劇下降。伴隨著黃河鯉魚養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，疾病發(fā)生頻繁，嚴重制約了黃河鯉魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，黃河鯉魚抗病研究越來越受到重視。過氧化物還原酶（Peroxiredoxin，Prx）是抗氧化酶家族成員之一，廣泛存在于各

2、種生物體內，能夠通過消除細胞內的烷基過氧化氫和過氧化氫等氧化攻擊，維持細胞內氧化還原平衡。本文以我國重要的淡水養(yǎng)殖魚類黃河鯉魚為實驗材料，對黃河鯉魚典型2-Cys Prx基因中的Prx3和Prx4進行研究，目的是闡明抗氧化蛋白Prx在黃河鯉魚免疫系統(tǒng)中的作用機制，為魚類抗病防御機制的研究提供有效的理論依據(jù)。
　　依據(jù)NCBI中提供的鯉魚全基因組序列信息，采用RT-PCR方法，從黃河鯉魚肝臟中克隆得到Prx3和Prx4。Prx3基因

3、組全長是2816bp，其中5，端不翻譯區(qū)（Untranslated Regions，UTR）為196bp，開放閱讀框（Open Reading Frame，ORF）為753bp，編碼250個氨基酸，推導其編碼蛋白的分子量是27.01kDa，理論等電點為8.25。Prx4基因組全長是3475bp，其中開放閱讀框為783bp，編碼260個氨基酸，推導其編碼蛋白的分子量是29.11kDa，理論等電點為5.98。Prx3蛋白的二級結構包含29.

4、60％α-螺旋和7.20%β-折疊；Prx4二級結構包含31.15%α-螺旋和10.77%β-折疊。對Prx3和Prx4進行同源性分析發(fā)現(xiàn)，黃河鯉魚和其他所分析的魚類均含有共同的保守催化中心“FTFVCPTEI”和“GEVCPA”。經序列對比及系統(tǒng)發(fā)育進化樹分析表明黃河鯉魚Prx3和Prx4與斑馬魚、新月魚、棘魚的過氧化物還原酶基因具有非常高的同源性。轉錄水平分析顯示，Prx3和Prx4基因在黃河鯉魚的12個組織（性腺、肝臟、肌肉、鰭、

5、魚鰾、眼、腦、鰓、脾臟、腸、腎臟、心臟）中均有表達，其中Prx3在腎臟中的表達量最高，肌肉次之，在鰭中表達量最低。Prx4在腎中的表達量最高，在性腺中的表達量較低于腎臟，在魚鰾中表達量最低。腹腔注射嗜水氣單胞菌后，提取其肝，脾和腎3個組織進行表達變化分析，發(fā)現(xiàn)在不同的時間段這3個組織Prx3和Prx4都有明顯的變化。在感染6h后，肝臟和脾臟中的Prx3和Prx4的表達量顯著增加，之后逐漸下降。在腎臟中，感染6h后Prx3和Prx4的表達

6、量顯著下降，之后有上升趨勢。這顯示了Prx3和Prx4在黃河鯉魚遭受病原菌感染時具有較強的應答水平。
　　擴增Prx4基因的成熟肽后，Sal I、EcoR I雙酶切擴增片段和原核表達載體pMAL-c5x，構建獲得重組質粒pMAL-c5x-Prx4，經酶切和測序鑒定，目的基因正確插入表達載體，將其轉入E.coli BL21中，構建重組表達質粒菌E.coli BL21/pMAL-c5x-Prx4，SDS-PAGE檢測表明，Prx4能在