1、本研究利用青海高原獨(dú)特的區(qū)位優(yōu)勢(shì)和資源優(yōu)勢(shì)開展菊芋種質(zhì)資源的ISSR分子標(biāo)記研究,基于ISSR數(shù)據(jù)并結(jié)合形態(tài)性狀,分析菊芋不同種質(zhì)資源的遺傳多樣性,旨在從分子水平上揭示其品種差異,為充分了解菊芋資源現(xiàn)狀、有效保存和鑒定品種以及豐富種質(zhì)資源信息庫(kù)提供理論依據(jù),也為進(jìn)一步發(fā)掘與性狀相關(guān)聯(lián)的標(biāo)記及攜帶載體,進(jìn)行基因定位和品種改良奠定基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)主要采用從青海高原菊芋種植資源庫(kù)中篩選出表現(xiàn)特異性的24份菊芋資源,對(duì)其2年植物學(xué)性狀進(jìn)行

2、調(diào)查統(tǒng)計(jì),并提取24份菊芋資源 DNA進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增,結(jié)合植物學(xué)數(shù)據(jù)與ISSR-PCR擴(kuò)增數(shù)據(jù)進(jìn)行菊芋資源遺傳多樣性分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1、對(duì)24份菊芋資源2年內(nèi)植物學(xué)形狀進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì),主要包括地上部分、地下部分性狀。結(jié)果表明:24份菊芋資源塊莖性狀主要有:紡錘狀、不規(guī)則瘤狀、棒狀、球形、楔形;塊莖顏色主要有:紫色、紫紅色、白色、粉紅色;地上部份主要性狀主要包括:葉形、絨毛、花青素等。
　　2、通過正交設(shè)計(jì)不

3、同因素水平,篩選出最佳組合后進(jìn)行單因素優(yōu)化,建立了菊芋 ISSR-PCR反應(yīng)體系,結(jié)果為:菊芋20μl最佳反應(yīng)體系包括10×PCR buffer,200μmol/L dNTP,0.5μmol/L引物,1.5 mmol/L Mg2+,1.0U TaqDNA聚合酶和50ng模板DNA。
　　3、對(duì)菊芋ISSR-PCR引物進(jìn)行篩選,最終篩選出擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性好的16條ISSR引物。
　　4、利用篩出的16條ISSR引物對(duì)24份

4、菊芋資源進(jìn)行ISSR-PCR進(jìn)行擴(kuò)增,對(duì)條帶進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析,建立0-1指紋。結(jié)果為:16條引物對(duì)24份材料共擴(kuò)增出242條清晰條帶,其中多態(tài)性條帶228條(91.9％)。各引物擴(kuò)增條帶數(shù)在6到22不等,平均為15.125條,引物UBC845得到的條帶數(shù)最多,為22條,引物UBC844條帶最少,為6條。16條引物擴(kuò)增的多態(tài)性條帶數(shù)在3到22不等,平均為14.25條。16條引物擴(kuò)增的多態(tài)位點(diǎn)百分率(P,%)變化范圍在50%~100%之間,平

5、均為94.2%。從擴(kuò)增圖譜中可以看出,菊芋ISSR擴(kuò)增的帶紋豐富,擴(kuò)增的DNA片段大小一般在200~2000bp之間。
　　5、結(jié)合24份菊芋資源2年植物學(xué)性狀數(shù)據(jù)與ISSR分子數(shù)據(jù)進(jìn)行遺傳多樣性分析,利用242個(gè)條帶建立遺傳相似矩陣,經(jīng)聚類分析構(gòu)建親緣關(guān)系樹狀圖可知,24份菊芋資源的遺傳距離分布在0.19~1.01之間,平均為0.45,在遺傳相似系數(shù)為0.68處做切割時(shí),24份菊芋資源可分為5類:第I類包括:青芋1號(hào);第II類包