1、烏塌菜(BrassicacampestrisL.ssp.chinensisvar.rosularis Tsen)又名塌菜、塌地松、塌棵菜、黑菜等,為十字花科(Cruciferae)蕓薹屬蕓薹種白菜亞種的一個變種。原產中國,早期主要分布在長江流域,因其營養(yǎng)豐富,尤以經霜雪后風味獨特而被全國各地廣泛栽培。
　　烏塌菜種質資源豐富,品種數量眾多,遺傳背景復雜,各地區(qū)之間的引種較為普遍,出現同名異種、同種異名現象,因此研究烏塌菜遺傳多樣性

2、對烏塌菜種質資源保護、新品種選育和改良具有重要意義。目前,尚未見有利用ISSR分子標記技術進行烏塌菜遺傳多樣性分析的報道。本研究利用單因素和正交試驗建立并優(yōu)化了烏塌菜ISSR-PCR體系,利用該體系對烏塌菜的遺傳多樣性進行分析,本試驗主要研究結果如下:
　　1.采用單因素濃度梯度試驗和正交優(yōu)化相結合的方法,建立了烏塌菜ISSR-PCR擴增體系,并在此基礎上對退火溫度和循環(huán)數進一步優(yōu)化,最終確立了適合烏塌菜ISSR-PCR反應的最佳

3、體系和程序。即20μLPCR反應體系含:30ng模板DNA,0.50μmol?L-1引物,0.25mmol?L-1dNTP,1.0mmol?L-1Mg2+,1.0UTaqDNA聚合酶。PCR擴增程序為:94℃預變性3min;94℃變性30s,50.1℃退火1min,72℃延伸90s,35個循環(huán);72℃延伸7min,4℃保存。
　　2.用5條引物和8份烏塌菜種質材料對已建立的體系進行穩(wěn)定性檢測,結果顯示該體系程序穩(wěn)定可靠,可用于烏塌

4、菜的分子鑒別和遺傳多樣性分析。
　　3.從60條ISSR引物中篩選出9條,采用已優(yōu)化的反應體系,首次對48份烏塌菜材料DNA進行擴增。利用NTSYSpc2.10e軟件對ISSR-PCR擴增產物的數據矩陣進行UPGMA統(tǒng)計分析。結果表明:48份烏塌菜材料進行ISSR-PCR擴增共獲得103條帶,平均每條引物可擴增出11.4條擴增條帶,其中多態(tài)性條帶有85條,多態(tài)性比率達82.52％,得到的遺傳相似度表顯示,遺傳相似度在0.5922-