1、我國南方地區(qū)夏季高溫時間較長，熱應激一直是困擾奶牛生產的主要問題之一。當奶牛發(fā)生熱應激時，奶牛的生產性能、奶產品品質下降、免疫系統(tǒng)紊亂，使其更易受微生物及疾病的侵襲;同時還會導致奶牛受胎率下降、流產率升高，使養(yǎng)殖場蒙受相當大的經濟損失。因此，確定熱應激的分子調控網絡及其可能的作用機理，可為開發(fā)相關基因及其分子標記、選育耐熱高產優(yōu)質奶牛提供理論依據(jù)和技術支持。
　　 本試驗以60頭浙江省金華市伊康乳業(yè)奶牛場內中國荷斯坦牛為研究對象

2、，分析了在熱應激與非熱應激狀態(tài)下中國荷斯坦牛泌乳中、后期外周血的牛全基因組表達譜的變化情況。通過對熱應激與非熱應激狀態(tài)下前后差異基因的KEGG通路分析，選取MAPKs信號通路中兩倍上調或下調差異表達基因作為奶牛耐熱性能相關的候選基因。同時，選取140頭處于泌乳前期的中國荷斯坦牛（其中57頭有生產數(shù)據(jù)），測試并分析了在非熱應激期(15℃)、臨界期(26℃)和熱應激期(37℃)的直腸溫度、血常規(guī)和血清生化指標的變化情況，進行了c-Jun和c

3、-Fos基因的SNPs與上述指標和生產性能的之間的關聯(lián)分析，初步分析了c-Jun、c-Fos基因用于中國荷斯坦牛熱應激分子標記輔助育種的可行性。
　　 結果如下:
　　 1.泌乳中、后期的中國荷斯坦牛在熱應激和非熱應激狀態(tài)下外周血牛全基因組表達譜芯片結果顯示，不同時期基因的檢測數(shù)及檢測率為泌乳早期15007/62.20％，熱應激下泌乳中期14308/59.30％，泌乳后期15241/63.20％，熱應激下泌乳后期1473

4、4/61.10％。泌乳中、后期在熱應激和非熱應激狀態(tài)下分別上調16個，下調26個基因。
　　 2.泌乳中、后期的中國荷斯坦牛在熱應激和非熱應激狀態(tài)下外周血的牛全基因組表達譜中2倍上調或下調的差異表達基因進行KEGG通路分析后，選取MAPKs信號通路進一步分析，發(fā)現(xiàn)該通路中2倍上調或下調的差異表達基因——p53、c-Jun c-Fos、TGFBR2、PRKACA、PRKACB、IL1B和GADD45A，涉及蛋白結合、受體活性、轉錄

5、因子活性、絲/蘇氨酸蛋白激酶活性和蛋白激酶活性等多種分子功能。
　　 3.對非熱應激期(15℃)、臨界期(26℃)和熱應激期(37℃)中國荷斯坦牛外周血血常規(guī)的測定表明，中國荷斯坦牛外周血液在溫度15℃時，血紅蛋白、紅細胞壓積、平均血紅蛋白含量、紅細胞體積分布寬度、血小板計數(shù)、血小板壓積和平均血小板體積與上述指標在溫度為26℃時期和37℃時期差異極顯著變化(P＜0.01)，其中紅細胞壓積26℃時期與37℃時期差異顯著下降(P＜0

6、.05)、平均血紅蛋白濃度在26℃時期與37℃時期極顯著(P＜0.01)上升。其余指標在26℃時期和37℃時期比較差異不顯著(P＞0.05)。平均紅細胞體積在三個溫度下均不顯著(P＞0.05)。
　　 4.中國荷斯坦牛直腸溫度隨環(huán)境溫度的提高也逐漸增加，熱應激期(37℃)和熱應激臨界期(26℃)的中國荷斯坦牛直腸溫度極顯著高于非熱應激期(15℃)（P＜0.01），熱應激期(37℃)雖較熱應激臨界期(26℃)有所增加，但二者間差異

7、不顯著(P＞0.05)。
　　 5.中國荷斯坦牛外周血血清中谷胱甘肽過氧化物酶含量和總抗氧化能力均隨環(huán)境溫度的提高極顯著地降低。其中各個時期間的谷胱甘肽過氧化物酶含量均存在極顯著的差異(P＜0.01);熱應激期(37℃)和熱應激臨界期(26℃)中國荷斯坦牛外周血血清中總抗氧化能力極顯著低于非熱應激期(15℃)（P＜0.01），熱應激期(37℃)總抗氧化能力極顯著低于熱應激臨界期(26℃)（P＜0.05）。
　　 6.以中

8、國荷斯坦?；蚪MDNA為模板，對基因芯片篩選出MAPKs信號通路中差異基因進行SNPs的檢測。結果發(fā)現(xiàn)，c-Jun和c-Fos基因在試驗群體中檢測到中度多態(tài)的SNPs，并且與部分血常規(guī)、直腸溫度及血清生化指標和泌乳性狀的關聯(lián)分析。
　　 SNP c-Jun P1與部分血常規(guī)的關聯(lián)分析結果表明，各基因型對部分血常規(guī)指標無顯著性影響(P＞0.05)。SNP c-FosP5與部分血常規(guī)的關聯(lián)分析結果表明，SNP c-Fos P5與紅細

9、胞計數(shù)間存在顯著關聯(lián)(P＜0.05)，AA型的紅細胞計數(shù)值顯著高于GG型（P＜0.05），呈現(xiàn)出AA＞AG＞GG的趨勢。
　　 SNP c-Jun P1與直腸溫度及血清生化指標的關聯(lián)分析結果表明，僅發(fā)現(xiàn)SNP c-Jun P1雜合型在熱應激期(37℃)總抗氧化能力顯著高于G缺失純合型(P＜0.05)，呈現(xiàn)出G—GG＞——的趨勢。SNP c-Fos P5與直腸溫度及血清生化指標的關聯(lián)分析結果表明，SNP c-Fos P5與熱應激期

10、(37℃)的谷胱甘肽過氧化物酶酶活顯著相關，其中AA型在熱應激期(37℃)谷胱甘肽過氧化物酶酶活顯著低于GG型（P＜0.05），呈現(xiàn)出AA＜AG＜GG的趨勢。
　　 SNP c-Jun P1與泌乳性狀的關聯(lián)分析結果表明，SNP c-Jun P1與乳脂率存在顯著關聯(lián)(P＜0.05)，GG型顯著高于G—型(P＜0.05)。對305天產奶量、305天乳脂量、305天乳蛋白量、乳蛋白率和體細胞計數(shù)無顯著性影響(P＞0.05)。SNP c