1、該研究的目的是建立可檢測(cè)甘蔗黑穗病的SCAR標(biāo)記.該文通過(guò)預(yù)備試驗(yàn),優(yōu)化了甘蔗RAPD反應(yīng)組份和反應(yīng)程序,建立了適于甘蔗的RAPD反應(yīng)條件.采用隨機(jī)引物PCR擴(kuò)增,對(duì)雜交親本Ya71-374、Co1001及其部分雜交后代進(jìn)行了RAPD分析,篩選到與抗、感特異的多態(tài)性片段各一條,片段大小分別約為700bp和800bp.采用T-MD 18克隆載體,對(duì)700bp片段進(jìn)行克隆,通過(guò)PCR和酶切鑒定,篩選陽(yáng)性重組克隆子用于測(cè)序.測(cè)序結(jié)果顯示該片段

2、的實(shí)際長(zhǎng)度為702bp,根據(jù)其兩端的序列,設(shè)計(jì)了一對(duì)上、下游長(zhǎng)度分別為23bp和22bp的引物,并對(duì)上述材料進(jìn)行PCR檢測(cè).結(jié)果顯示所有材料均擴(kuò)增出一條702bp的條帶,但感病親本和病感個(gè)體中還擴(kuò)增出一條長(zhǎng)約400bp的多態(tài)性片段;初步研究還顯示一組用于常規(guī)抗性鑒定的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照種也有類(lèi)似的標(biāo)記結(jié)果,從而將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記,該SCAR標(biāo)記有望用于甘蔗抗、感黑穗病基因型的鑒定.其上、下游引物的序列如下:上游引物:5'TTCCCC