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文檔簡介
1、2005年以來,人們在硬骨魚中發(fā)現(xiàn)了一種新型免疫球蛋白,如在斑馬魚、虹鱒魚、紅鰭東方鲀和鯉魚中分別發(fā)現(xiàn)了IgZ、IgT和IgM-Z,雖然命名不同,但系統(tǒng)進化分析表明它們都屬于同一家族。因其為硬骨魚特有,現(xiàn)在趨向于將其以硬骨魚(teleost)首字母定義命名為IgT。IgT的重鏈基因位于可變區(qū)基因連鎖群和μ鏈恒定區(qū)之間,有獨立的D區(qū)和J區(qū),其恒定區(qū)的數(shù)目大多數(shù)為4個。IgT具有多樣性,在不同種的硬骨魚中,IgT的結構類似但功能不完全相同;
2、而在同一種魚中也存在兩種或兩種以上的IgT。目前對IgT的功能研究較少,其中虹鱒魚IgT的功能有了較清楚的結論,發(fā)現(xiàn)其在虹鱒魚的粘膜免疫中發(fā)揮很大的作用。鯉魚中報道了兩種IgT,一種是IgM-IgZ嵌合體形式,另一種包含四個恒定區(qū),命名為IgZ1,但本實驗又克隆出不同于兩者的另一種IgT,并對其在粘膜免疫中的功能做了初步研究。
本研究通過分子克隆得到鯉魚的一種新型免疫球蛋白的重鏈C區(qū)的cDNA片段,為了對比分析同時克隆出鯉魚的
3、IgM、IgM-IgZ和IgZ1的重鏈C區(qū)cDNA。通過對此cDNA序列編碼的氨基酸序列的多肽結構預測、與其它硬骨魚IgT氨基酸序列比對分析和進化分析,最終確定克隆得到了鯉魚的一種新型免疫球蛋白,命名為IgT。用RT-PCR方法對四種免疫球蛋白在鯉魚體內的組織表達差異進行了分析,分別利用Real-time PCR和RT-PCR技術檢測了經(jīng)豚鼠氣單胞菌浸泡刺激和肌肉注射刺激后的鯉魚體內多種組織中四種免疫球蛋白的表達變化,從而對新型免疫球蛋
4、白IgT的粘膜免疫功能進行了初步研究。
克隆得到的鯉魚IgT重鏈C區(qū)cDNA序列全長1395 bp,由1251 bp的開放閱讀框(ORF)和144bp的3’非翻譯區(qū)(3’-URT)組成,其中ORF區(qū)編碼416個氨基酸的前體IgT,可形成4個免疫球蛋白樣區(qū)。序列分析表明,鯉魚的IgT與鯉魚的IgM-IgZ和IgZ1同源性分別為67.4%和51.0%。系統(tǒng)進化表明,鯉魚的IgT與其它硬骨魚IgT序列處于同一分支上,且與鯉魚的IgM
5、-IgZ親緣關系最近。
利用RT-PCR方法檢測了四種免疫球蛋白在正常鯉魚組織中轉錄水平的表達差異,其中IgM的水平高于其它三種Igs,且分布較廣泛,在頭腎、后腸、鰓、脾臟等組織中都有較高的水平;IgT在頭腎中的表達水平最高,其次為血液和鰓;IgM-IgZ和IgZ1在頭腎和脾臟中較高水平的表達。
將滅活的豚鼠氣單胞菌通過不同的免疫方式刺激鯉魚后 IgM、IgT、IgM-IgZ和IgZ1的表達變化模式不同。浸泡免疫后,
6、相對于對照組IgT在各組織中免疫后7天時出現(xiàn)明顯的上調趨勢,隨后有明顯的下調,直到在免疫后21天時有很明顯的上調趨勢且達到最大值。而IgM水平一直較高但變化趨勢不明顯。經(jīng)過肌肉注射刺激后,各組織的IgM和IgT的表達水平在刺激后7天時有上調趨勢,隨后上調倍數(shù)持續(xù)升高,到第28天或35天時開始下降。但不同組織中的變化模式不完全相同。通過分析結果,表明鯉魚的IgT、IgM-IgZ和IgZ1在粘膜免疫中發(fā)揮重要的作用,尤其在免疫應答的早期發(fā)揮
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