1、全世界鹽堿地面積約占世界總耕地面積的20％。由于干旱，不合理的灌溉以及化肥的過度使用，工業(yè)污染加劇，土壤鹽堿化正不斷擴大，可供耕種的土地面積正日趨減少。水稻是世界1/3人口的主食，但一直處于供不應求的狀況，因此，提高水稻產量，改良稻米品質關系到人類的生存和發(fā)展。在鹽堿地區(qū)，利用轉基因手段來獲得高耐鹽的轉基因水稻，推廣具有廣泛適應性的水稻耐鹽優(yōu)異品種，是開辟鹽堿荒地和水稻增產的一個新增長點，目前運用最廣泛的轉基因水稻方法之一是農桿菌介導轉

2、化法。研究建立農桿菌介導耐鹽基因高效水稻轉化系統(tǒng)具有重要理論和實際指導意義。根據外源基因是耐鹽基因的特點，建立農桿菌介導無選擇標記耐鹽基因水稻轉化系統(tǒng)對轉基因水稻商品化應用具有重大意義，避免了抗性標記基因可能存在對食品和生態(tài)環(huán)境的潛在危害。
　　 制約農桿菌介導轉化水稻效率的主要因素是周期長和轉化受體的狀態(tài)。本文從這兩方面入手，建立高效農桿菌介導轉化水稻系統(tǒng)。根據外源基因是耐鹽基因，探討NaCl作為篩選劑可行性，但傳統(tǒng)確定NaC

3、l篩選濃度需要繪制NaCl濃度梯度對愈傷組織增重率之間的生長曲線。此過程比較繁瑣且容易造成污染和誤差。探討利用NaCl對水稻種子發(fā)芽率的抑制效果作為確定水稻耐鹽基因轉化中愈傷組織篩選所需NaCl使用濃度的可行性，同時比較NaCl與潮霉素的篩選效果。最后，將兩者有機結合，對不同類型的耐鹽基因進行農桿菌介導無標記高效轉化水稻，證明該系統(tǒng)是完全可行和有效的。主要實驗結果如下：
　　 (1)快速誘導水稻愈傷組織的建立
　　 在3

4、2℃暗培養(yǎng)7天誘導水稻愈傷組織的快速誘導系統(tǒng)，日本晴、秀水11、，春江06的出愈率均在60％以上，分別是92.87％、82.63％、64.83％;在28℃光培養(yǎng)7天誘導水稻愈傷組織的快速誘導系統(tǒng)，日本晴、秀水11、春江06的出愈率均在70％以上，分別是95.5％、93.07％、74.87％。愈傷表面突起，呈淡黃色，具有活力，完全符合轉化的要求，從傳統(tǒng)的愈傷組織誘導需要15天縮短到7天。
　　 (2)高效農桿菌介導轉化水稻的建立<

5、br>　　 采取熱激處理，中華11、秀水11、春江06轉化效率提高率分別在58.50％、21.96％、27.85％;液體共培養(yǎng)感染，三種水稻轉化率提高有60.57％、23.54％、25.17％，建立高效農桿菌介導轉化水稻。
　　 (3)簡便獲得NaCl有效篩選濃度法的建立
　　 根據常規(guī)的NaCl濃度梯度對愈傷組織增重率之間的生長曲線，確定愈傷組織增重抑制率為80％左右的NaCl濃度為合適的篩選濃度，此相應NaCl濃度

6、對四個品種水稻種子的發(fā)芽抑制率均達50％以上。因此，可選取對水稻種子的發(fā)芽抑制率達50％以上的NaCl濃度作為耐鹽基因轉化中篩選時NaCl有效濃度的重要參考。
　　 (4)證明轉化耐鹽基因中NaCl篩選的有效性和可行性
　　 根據選取的外源基因為耐鹽基因，以NaCl作為篩選劑，達到了篩選的目的，對中華11來說，NaCl篩選下轉化率為11.98％，潮霉素篩選下轉化率為14.43％;對秀水11來說，NaCl篩選下轉化率為32

7、.06％，潮霉素篩選下轉化率為42.64％;對春江06來說，NaCl篩選下轉化率為32.03％，潮霉素篩選下轉化率為41.39％，說明NaCl篩選效果與潮霉素篩選相近。
　　 (5)安全高效農桿菌介導轉化水稻的建立
　　 采用NaCl篩選與高效農桿菌介導轉化水稻相結合，發(fā)現秀水11轉化效率提高率29.9％，建立安全高效農桿菌介導轉化水稻。
　　 (6)證明安全高效農桿菌介導耐鹽基因轉化日本晴的可行性和有效性

8、>　　 選取不同耐鹽機制的耐鹽基因，將其作為外源基因采用建立的農桿菌介導無選擇標記耐鹽基因高效轉化水稻系統(tǒng)對日本晴進行轉化，實驗表明：BADH、CMO、PKCC的轉化效率均在40％以上，分別是44.03％、46.29％、44.68％，證明農桿菌介導無標記耐鹽基因高效轉化日本晴是可行和有效的。
　　 綜上所述，安全，快速，高效的農桿菌介導耐鹽基因轉化水稻系統(tǒng)已經建立。即32℃光培養(yǎng)7天后，進行43℃水浴30min，冰浴1min，