陸地棉TM-1背景的海島棉染色體片段導(dǎo)入系的培育鑒定和纖維強(qiáng)度QTL精細(xì)定位.pdf_第1頁(yè)
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1、棉花是世界性的重要經(jīng)濟(jì)作物。中國(guó)是世界上最大的棉花生產(chǎn),消費(fèi)和紡織國(guó),隨著我國(guó)人民生活水平的飛速提高和紡織品配額的取消,紡織品消費(fèi)和出口必將快速提高進(jìn)而對(duì)棉花的需求越來(lái)越大,品質(zhì)要求也越來(lái)越高。
   陸地棉(Gossypium hirsutumL.)和海島棉(G.barbadenseL.)是棉花的2個(gè)四倍體栽培種,陸地棉產(chǎn)量高,纖維品質(zhì)中等,海島棉產(chǎn)量低但纖維細(xì)強(qiáng),可紡100~200支紗,是紡高支紗的原料。遺傳基礎(chǔ)狹窄已經(jīng)成為

2、目前限制陸地棉遺傳改良的主要因素。在陸地棉和海島棉間進(jìn)行優(yōu)良基因的高效轉(zhuǎn)移滲透對(duì)二者的遺傳改良具有極為重要的現(xiàn)實(shí)意義,而限制這一過(guò)程的主要因素是連鎖累贅。染色體片段導(dǎo)入系了除目標(biāo)基因所在座位的局部區(qū)域外,基因組其余部分都是相同的,在這樣的材料間找到的多態(tài)性標(biāo)記才可能與目標(biāo)基因緊密連鎖,是QTL精細(xì)定位和圖位克隆的一類理想群體。本研究以海陸雜交群體為基礎(chǔ),通過(guò)回交和標(biāo)記輔助選擇構(gòu)建了海島棉的染色體片段導(dǎo)入系,并利用這過(guò)程產(chǎn)生的高代回交群體

3、和片段導(dǎo)入系對(duì)纖維品質(zhì)等性狀進(jìn)行了QTL標(biāo)記定位研究。同時(shí)還研究了QTL的精細(xì)定位。研究的主要結(jié)果如下:
   1.陸地棉遺傳標(biāo)準(zhǔn)系TM-1背景海島棉染色體片段導(dǎo)入系的培育
   以纖維品質(zhì)中等陸地棉遺傳標(biāo)準(zhǔn)系TM-1為母本與優(yōu)質(zhì)抗黃萎病海島棉“海7124”雜交,然后用TM-1回交,回交4-5次和自交一次,在BC5S1代借助330個(gè)SSR分子標(biāo)記進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)(Maker-assisted Selection,

4、MAS)。BC5S1代雜合的單株自交1-2代得BC5S2-3繼續(xù)進(jìn)行MAS選擇,BC4S1代的單株自交直到BC4S2-3繼續(xù)進(jìn)行MAS,從而培育了國(guó)內(nèi)首套陸地棉標(biāo)準(zhǔn)系TM-1背景的海島棉染色體片段導(dǎo)入系。
   這套導(dǎo)入系共有169個(gè)家系,單片段導(dǎo)入系有51個(gè),占30.18%,有的家系最多導(dǎo)入了5個(gè)片段,同時(shí)一部分家系的替換片段是雜合的。導(dǎo)入片段最短的為3.54cM,最長(zhǎng)的是46.03cM,平均長(zhǎng)度為17.70cM,總的長(zhǎng)度是3

5、526.34cM,覆蓋率是80.9%。
   A5(Chr.5)和A8(Chr.8)染色體被供體片段完全覆蓋,D1(Chr.15)沒(méi)有被供體片段覆蓋的部分最大,達(dá)到了50.8cM,D7(Chr.16)沒(méi)有被供體片段覆蓋的部分最小,只有2.2cM。供體片段沒(méi)有覆蓋的部分主要集中在染色體的兩端和中間部分。
   2.高代回交群體和染色體片段導(dǎo)入系進(jìn)行QTL的定位
   2005年夏在南京江浦棉花試驗(yàn)站種植BC5S1和

6、BC4S1,每隔20行種植對(duì)照TM-1;2006年夏在南京江浦棉花試驗(yàn)站種植BC5S2和BC4S2家系,每隔10行種植對(duì)照TM-1;2008年夏在南京江浦棉花試驗(yàn)站種植全部染色體片段導(dǎo)入系,完全隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn),兩次重復(fù),每隔10行種植對(duì)照TM-1。調(diào)查BC5S1的葉型、花冠顏色、花瓣基部紅心、花藥顏色;調(diào)查染色體片段導(dǎo)入系各行的鈴型、莖稈顏色和茸毛。對(duì)三個(gè)世代的產(chǎn)量組分(鈴重和衣分)及纖維品質(zhì)性狀(纖維長(zhǎng)度,纖維強(qiáng)度,馬克隆值,整齊度,短

7、纖維率,伸長(zhǎng)率及成熟度)進(jìn)行調(diào)查。
   通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)了染色體片段導(dǎo)入系中出現(xiàn)的幾種表型變異,包括類im(immaturity,不成熟纖維)、葉脈融合、雞腳葉、青莖、莖稈光滑和鈴形的變異等。
   用MapManager QTXb20在p<0.001的設(shè)定下,進(jìn)行單標(biāo)記分析。在BC5群體中檢測(cè)到23個(gè)顯著性標(biāo)記,其中纖維品質(zhì)的17個(gè),產(chǎn)量組分(鈴重和衣分)6個(gè)。在BC5S1群體中檢測(cè)到27顯著性標(biāo)記,其中纖維品質(zhì)的22個(gè)

8、,產(chǎn)量組分(鈴重和衣分)5個(gè)。在CSIL群體中檢測(cè)到14個(gè)顯著性標(biāo)記,其中纖維品質(zhì)的12個(gè),產(chǎn)量組分(鈴重和衣分)2個(gè)。
   根據(jù)某性狀的單標(biāo)記分析結(jié)果進(jìn)行1000次重排計(jì)算(Permutation test)估計(jì)各個(gè)性狀的LR閾值,針對(duì)特定的染色體進(jìn)行區(qū)間作圖。通過(guò)1000次重排計(jì)算,得到了低顯著水平,顯著水平及高顯著水平等3個(gè)水平的LR閾值。在低顯著水平下檢測(cè)到了所有的顯著性標(biāo)記。同時(shí)在三個(gè)群體中用區(qū)間作圖檢測(cè)到影響多個(gè)性

9、狀的標(biāo)記區(qū)間,在BC5群體中檢測(cè)到3個(gè)區(qū)間影響多個(gè)性狀;在BC5S1群體中檢測(cè)到5個(gè)區(qū)間影響多個(gè)性狀;在CSIL群體中檢測(cè)到3個(gè)區(qū)間影響多個(gè)性狀。
   3.利用染色體片段導(dǎo)入系精細(xì)定位纖維品質(zhì)的QTL
   在培育染色體片段導(dǎo)入系的過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)一個(gè)純合的單片段導(dǎo)入系在纖維強(qiáng)度上與輪回親本存在明顯差異,從而認(rèn)為該片段上存在控制纖維強(qiáng)度的QTL。然后該家系與陸地棉遺傳標(biāo)準(zhǔn)系TM-1雜交得到F1,種植600個(gè)F2和F2:3家

10、系進(jìn)行連鎖作圖,進(jìn)行導(dǎo)入片段的分析和纖維強(qiáng)度QTL的精細(xì)定位。得到的結(jié)果如下:
   經(jīng)過(guò)F2分離群體重新作圖得到了導(dǎo)入片段的長(zhǎng)度是70.870cM,是通過(guò)已發(fā)表圖譜計(jì)算得到的片段長(zhǎng)度(31.10cM)的2.84倍。在F2分離群體中共檢測(cè)到2個(gè)QTL。一個(gè)纖維強(qiáng)度的QTL,解釋的表型變異是6.15%。1個(gè)馬克隆值的QTL解釋的表型變異是9.27%。F2:3群體中檢測(cè)到5個(gè)QTL,其中纖維強(qiáng)度3個(gè)QTL,整齊度2個(gè)QTL。纖維強(qiáng)度

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