根癌農(nóng)桿菌介導AtPCS1基因轉化甘肅紫花苜蓿的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、利用植物修復重金屬污染的土壤是一種“綠色”低成本的環(huán)境修復手段。本實驗通過遺傳轉化技術將重金屬螫合肽合成酶基因AtPCS1轉入生物量大、適應性強的紫花苜蓿中,以期獲得能富集重金屬的轉基因植株,為今后的污染土壤修復工作提供基礎材料。
   首先,研究了隴東、甘農(nóng)三號、甘農(nóng)一號等九個基因型的紫花苜蓿的子葉、真葉和胚軸在不同培養(yǎng)基上的愈傷組織形成及分化能力。結果表明:子葉的再生能力強于葉片和胚軸;隴東和甘農(nóng)一號兩個品種分化能力最強,其

2、子葉愈傷組織的形成率分別為95.0%和94.0%,分化率均為45.0%;F培養(yǎng)基和G培養(yǎng)基是子葉和胚軸愈傷組織形成及分化的最佳培養(yǎng)基。進一步比較了隴東、甘農(nóng)三號和甘農(nóng)一號的真葉、胚軸、子葉、莖段不同外的植體的分化再生能力,莖段在G培養(yǎng)基上可以直接分化出苗,子葉較胚軸和葉片分化時間短,且叢生芽形成數(shù)量多。再生芽可在原培養(yǎng)基上直接分化出苗,并在蔗糖濃度為12.5g/L的1/2MS培養(yǎng)基上完成生根。
   其次,用植物表達載體pBI1

3、21-AtPCS1轉化農(nóng)桿菌LBA4404和EHA105,經(jīng)菌落PCR鑒定獲得陽性菌,采用葉盤法對隴東和甘農(nóng)一號兩個品種不同類型的外植體遺傳轉化,通過GUS組織化學染色及對抗性愈傷的形成率分析,結果表明:子葉是適合轉化的最佳外植體;隴東和甘農(nóng)一號苜蓿子葉的轉化效率無顯著差異。轉化后的外植體在含有卡那霉素和頭孢霉素的F培養(yǎng)基上分化芽,在1/2MS培養(yǎng)基上順利完成生根。
   取部分轉基因苗的葉片進行GUS染色和PCR鑒定,結果表明

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