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文檔簡介
1、絨山羊是重要的絨用經(jīng)濟動物,其絨毛生長具有較強的季節(jié)性,但不同品種之間有很大的差異,大多數(shù)絨山羊在非長絨季節(jié)(5-8月份)不長絨,而遼寧絨山羊一些品系可以常年長絨(6月開始長絨)。埋植褪黑激素可以促進絨山羊在非長絨季節(jié)長絨,從而達到四季長絨的目的。本研究以內(nèi)蒙古白絨山羊為主要研究對象,采用分子標記和基因芯片技術(shù),從候選基因和差異表達基因篩選入手,研究絨山羊產(chǎn)絨經(jīng)濟性狀的遺傳多態(tài)性和非長絨季節(jié)埋植褪黑激素絨山羊皮膚組織差異表達基因,初步探
2、討促進絨山羊絨毛生長的因素及其分子調(diào)控機理。
1、絨山羊內(nèi)分泌激素類基因SNP分析
應用PCR-SSCP和DNA測序技術(shù),以內(nèi)蒙古阿爾巴斯型、阿拉善型、二郎山型以及罕山白絨山羊4個品種(系)共456個樣本為實驗材料,分析PRL、PRLR、MLTR1a、MLTR1b、IGF-I和TG6個候選基因共16個位點的遺傳多態(tài)性,結(jié)果表明:
?。?)在絨山羊PRL基因Exon5區(qū)域P2引物位點存在X76049:g.576
3、bp處C-A突變,該突變導致第176個密碼子CCC變成ACC,從而使脯氨酸變成蘇氨酸(Pro-Thr),該位點SNP對絨山羊絨厚度存在顯著影響(P<0.01),同時還對阿爾巴斯絨山羊產(chǎn)羔數(shù)存在邊際顯著影響(P=0.055);在PRLR基因Exon10區(qū)域P3引物位點存在HQ266606:g.1076bp處T-C突變,該突變導致第359個密碼子CTT變成CCT,從而使亮氨酸變成脯氨酸(Lue-Pro),該位點SNP對阿爾巴斯絨山羊羊絨細度
4、存在顯著影響(P<0.05);
?。?)在絨山羊MLTR1b基因Exon2區(qū)域P8引物位點存在NM_001206907:g.648bp處C-G突變,該突變沒有導致氨基酸的改變,還存在NM_001206907:g.665bp處G-A,該突變導致第223個密碼子CGC變成CAC,從而使精氨酸變成組氨酸(Arg-His),該位點SNP對絨山羊產(chǎn)絨量有顯著影響(P<0.05)。同時,該多態(tài)位點基因型與年齡互作效應對絨山羊絨厚度有顯著影響
5、(P<0.05);MLTR1b基因Exon2區(qū)域P9引物位點存在NM_001206907:g.1015bp處G-A突變,該突變導致第339個密碼子GGC變成AGC,從而使甘氨酸變成絲氨酸(Gly-Ser),該位點SNP與年齡互作效應對絨山羊絨細度存在邊際顯著影響(P=0.056);這兩個位點多態(tài)對絨山羊產(chǎn)羔數(shù)、羔羊初生重等繁殖性狀均無顯著影響(P>0.05)
?。?)在絨山羊TG基因Exon9區(qū)域P14引物位點存在NM_1738
6、83:g.1895bp處C-T突變,該突變導致第632個密碼子GCG變成GTG,從而使丙氨酸變成纈氨酸(Ala-Val);在Exon11區(qū)域P16引物位點存在NM_173883:g.2849bp處G-A突變,該突變導致第950個密碼子CGC變成CAC,從而使精氨酸變成組氨酸(Arg-His)。這兩個位點SNP對絨山羊體重、產(chǎn)羔數(shù)和產(chǎn)絨性狀均無顯著影響(P>0.05)。
2、絨山羊皮膚差異表達基因的篩選、鑒定和特征分析
7、?。?)通過基因芯片技術(shù)篩選絨山羊在非長絨期埋植MLT促進羊絨生長的相關(guān)基因。篩選出差異表達的基因95個,其中61個表達上調(diào)、34個下調(diào)。這些異常表達的基因按照功能分類,參與組成細胞成分的基因占18.33%,參與分子功能的基因占47.78%,參與生物學過程的基因占33.89%。
?。?)Pathway信號通路分析表明:差異基因共參與了55條信號通路,其中CTNNB1基因參與的Wnt信號通路,CYP2B基因參與的維生素A代謝和外源
8、藥物代謝等信號通路可能與埋植MLT促進絨山羊非長絨期絨毛生長和毛囊發(fā)育有關(guān)。
?。?)采用Real time定量PCR檢測技術(shù),選擇芯片試驗結(jié)果中表達差異顯著上調(diào)的PAX6基因和顯著下調(diào)的CSN2基因,進一步擴大樣本對芯片結(jié)果準確性做驗證。結(jié)果表明,PAX6基因在埋植MLT試驗組羊皮膚中的表達量是對照組羊皮膚中表達量的2.399倍,CSN2基因在試驗組羊皮膚中的表達量是對照組羊皮膚中表達量的0.044倍,與基因芯片結(jié)果完全相符,
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