1、選育全雌或強雌性黃瓜品種是黃瓜育種主要工作目標之一。黃瓜雌花節(jié)位出現(xiàn)早、數(shù)量多、分布均，是黃瓜早熟、高產、穩(wěn)產的基礎。目前，已明確黃瓜的性別分化除受主控基因影響外，還受多種因素制約，其中內源乙烯是重要影響因素之一。許多研究者認為黃瓜ACC合成酶基因與控制雌性的F位點緊密連鎖。其中，Cs-ACS1基因與F基因同源性極高，早期被誤認為就是F基因。可見，黃瓜Cs-ACS1基因與黃瓜雌性分化存在相關性。為了驗證Cs-ACS1基因對轉基因黃瓜性型

2、分化的影響，本試驗采用PCR方法，從全雌系黃瓜0401基因組DNA中擴增出2333 bp的基因片段，構建成正義、反義基因表達載體以及由該基因啟動子控制紅色熒光蛋白報告基因的表達載體，并將上述三種植物表達載體的目的基因導入黃瓜，通過對轉基因植株的觀察、分析，證實Cs-ACS1基因與黃瓜雌性性別分化密切相關。本試驗主要研究內容及研究結果如下：
　　 1.克隆了Cs-ACS1基因
　　 克隆得到Cs-ACS1基因，經BLAST

3、分析結果表明：所克隆的基因序列與公布的Cs-ACS1僅有1個堿基的差異，核苷酸序列同源性為98％，而推導編碼的247個氨基酸完全一致。上述結果表明：所克隆的基因為Cs-ACS1基因。
　　 2.Cs-ACS1正義基因導入黃瓜后發(fā)生共抑制，導致轉基因黃瓜植株雄性化
　　 將Cs-ACS1基因插入載體pVCT2102中，構建該基因的正義植物表達載體pVCT2214。經酶切及PCR檢測后，采用農桿菌介導法將Cs-ACS1正義基

4、因導入強雌系黃瓜0837(本實驗室繁育品種)中。移栽后共獲得12株成活轉基因黃瓜植株，PCR檢測初步確定Cs-ACS1正義基因已轉入黃瓜基因組中；通過對成活植株的表型觀察，發(fā)現(xiàn)12株轉基因黃瓜植株有10株全部開雄花，而且全部植株的頂芽也為雄花，表明Cs-ACS1基因與強雌黃瓜體內的Cs-ACS1基因相互抑制，限制自身Cs-ACS1基因表達，同時也限制轉入Cs-ACS1基因表達，即出現(xiàn)共抑制現(xiàn)象。
　　 3.Cs-ACS1反義基因

5、能導致轉基因黃瓜植株雄性化
　　 正義植物表達載體pVCT2214經限制內切酶酶切后，獲得反義植物表達載體pVCT2215。經檢測，確定該載體構建成功后，采用農桿菌介導法將Cs-ACS1反義基因轉入強雌系黃瓜0837中。移栽后，該轉基因黃瓜共成活2株，對成活的轉基因黃瓜檢測(PCR)，確定Cs-ACS1反義基因已轉入黃瓜基因組中；觀察成活2株反義轉基因黃瓜，發(fā)現(xiàn)植株全部開雄花，而且全部植株的頂芽也為雄花，推測發(fā)生反義抑制的作用。

6、
　　 4.Cs-ACS1-REF基因可在轉基因黃瓜的花芽中表達
　　 將Cs-ACS1基因插入含紅色熒光蛋白的載體中，得到植物表達載體pVCT2217。用農桿菌EHA105/pVCT2217菌液侵染黃瓜(強雌系0837)子葉，經培養(yǎng)獲得成活的轉Cs-ACS1-REF基因的黃瓜植株6株，全部開雄花。取轉Cs-ACS1-REF基因黃瓜基因組DNA進行PCR檢測，確定轉CsACS1-REF基因已轉入黃瓜基因組中。進行一周白化