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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究以32份蕓薹屬蔬菜種質(zhì)為材料,其中包括11份甘藍(lán)類蔬菜,11份白菜類蔬菜,10份芥菜類蔬菜,采用三種方法提取蕓薹屬蔬菜種子的DNA,探索出簡(jiǎn)單、快速、高效的,并適用于SSR分子標(biāo)記分析的DNA提取方法;進(jìn)一步采用31對(duì)SSR引物進(jìn)行蕓薹屬蔬菜種質(zhì)的鑒定與分析,試圖找到蕓薹屬三大類蔬菜種間的特異性片段,并明確蕓薹屬蔬菜種質(zhì)間的親緣關(guān)系;最后克隆和測(cè)序蕓薹屬蔬菜種間的特異性片段,并進(jìn)行序列分析,主要結(jié)果如下:
1.通過(guò)比
2、較三種不同的方法(SDS法、CTAB法、NaOH法)提取出的22份蕓薹屬蔬菜種子DNA的質(zhì)量,結(jié)果發(fā)現(xiàn):SDS法提取出的種子DNA質(zhì)量最好,完整性高,OD260/OD280的平均值為1.873,與CTAB法提取出的葉片DNA(OD260/OD280比值1.802~1.906)效果相當(dāng):CTAB法次之,其OD260/OD280平均值為1.600;NaOH法提取出的種子DNA質(zhì)量最差,OD260/OD280值均低于1.3。
2
3、.應(yīng)用SSR標(biāo)記,對(duì)32份蕓薹屬蔬菜中三大類蔬菜(白菜(Brassicarapa)、甘藍(lán)(Brassicaoleracea)、芥菜(Brassicajuncea))種間的特異性、種內(nèi)的多態(tài)性及親緣關(guān)系進(jìn)行分析。從31對(duì)引物中篩選出21對(duì)多態(tài)性引物,共擴(kuò)增出113條清晰、穩(wěn)定的多態(tài)性條帶。引物MF4、SSRRAS46、P004和NA3分別在甘藍(lán)類蔬菜、白菜類蔬菜、芥菜類蔬菜中有特異性條帶,通過(guò)10份驗(yàn)證性材料驗(yàn)證,其結(jié)果完全一致。21對(duì)多
4、態(tài)性引物的平均PIC值為0.604,引物B01可分別區(qū)分5個(gè)甘藍(lán)品種、8個(gè)白菜品種,JU5可區(qū)分開(kāi)5份芥菜品種。系統(tǒng)聚類分析將22份蕓薹屬蔬菜種質(zhì)分為兩大類群:甘藍(lán)類蔬菜為一類,白菜類和芥菜類蔬菜為一類,bootstrap值高達(dá)100%。在相似系數(shù)0.29處,白菜類蔬菜和芥菜類蔬菜分別聚為兩亞類。主坐標(biāo)分析與系統(tǒng)聚類分析結(jié)果一致。
3.對(duì)蕓薹屬蔬菜種間的特異性片段進(jìn)行克隆與測(cè)序,進(jìn)一步作序列分析,結(jié)果為,引物MF4在甘藍(lán)中
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