蜜蜂丙糖磷酸異構酶基因的克隆分析及原核表達與純化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蜜蜂是重要的經(jīng)濟昆蟲,也是昆蟲大量試驗的模式材料。丙糖磷酸異構酶(Triosephosphate isomerase TPI or TIM,EC5.3.1.1)是生物中廣泛存在的一種糖酵解酶,存在于多種組織中,催化二羥丙酮磷酸與3-磷酸甘油醛之間的可逆反應,且在糖酵解、脂肪酸合成、糖原異生和戊糖磷酸途徑中發(fā)揮著重要作用。為在分子水平上探明TPI的生物學功能,本文從意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)的肌肉組織中

2、提取總RNA,設計特異引物,采用RT-PCR的方法克隆了蜜蜂第16號染色體上的丙糖磷酸異構酶(AMTPI)基因的cDNA序列。運用生物信息學的方法對蜜蜂丙糖磷酸異構酶基因及其編碼蛋白序列進行了初步分析,得到了基因和蛋白質(zhì)組學研究中一些有價值的參數(shù)。AMTPI具有多種二級結構形式,是典型的(α/β)8結構,在SWISS-MODEL服務器三維建模后,運用ViewerLite5.0進行序列編輯,獲得了AMTPI的三級結構模型。將測序結果(Ge

3、nBank登錄號EU76098)與GenBank中的其他物種進行同源性分析。多重比對顯示AMTPI有多個保守結構,物種間的整體相似度較高,與家蠶、德國小鐮、黃粉蟲、麗蠅蛹集金小蜂、水稻等物種的基因相似性達69%以上,蛋白相似性達59%以上,用MEGA4軟件按MinimumEvolution方案進行分子系統(tǒng)演化分析,獲得了TPI氨基酸序列的分子進化樹,這為研究意大利蜜蜂的系統(tǒng)發(fā)生、遺傳變異以及家系、亞家系的親緣關系提供理論依據(jù)。將目的基因

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