犬科和貓科動物細小病毒分離株VP2基因的遺傳進化分析研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、肉食獸細小病毒屬于細小病毒科、細小病毒屬中的一類病毒。由肉食獸細小病毒引起的疾病存在于世界各地。在我國,無論是家養(yǎng)動物還是野生動物均有細小病毒相關(guān)疫病的流行,其中貓泛白細胞減少癥病毒是危害我國貓科、浣熊科和鼬科等多種家養(yǎng)、圈養(yǎng)、野生和經(jīng)濟動物的主要傳染病病原體之一。犬細小病毒感染的動物之多,其致病性之強,致死率之高,對我國軍犬、警犬、觀賞犬及家養(yǎng)犬的飼養(yǎng)造成了巨大的威脅。所以細小病毒的研究受到眾多學(xué)者的關(guān)注。該病毒VP2基因決定病毒的宿

2、主范圍、血凝性和抗原性。肉食獸細小病毒快速的演化速度與VP2蛋白上幾個關(guān)鍵氨基酸殘基的變異并迅速適應(yīng)宿主犬有關(guān)。 本研究根據(jù)Genbank登錄的貓泛白細胞減少癥病毒、犬細小病毒、水貂腸炎病毒VP2序列進行比較,選擇其保守序列,設(shè)計一對檢測肉食獸細小病毒的特異性通用引物,從2007年-2008年之間我國不同地方送檢的疑似CPV感染的30份犬科動物樣品中PCR檢測出18份CPV陽性樣品;并從20份疑似FPV感染的貓科動物病料樣品中檢

3、測出10份FPV陽性樣品。用F81細胞從18份CPV陽性樣品中分離鑒定到9株CPV,從10份FPV陽性樣品中分離鑒定到7株FPV,經(jīng)形態(tài)學(xué)、理化學(xué)、生物學(xué)和分子病毒學(xué)等進一步鑒定這16株病毒。通過設(shè)計肉食獸細小病毒VP2全長特異性通用引物,經(jīng)PCR擴增了VP2全長基因并進行克隆和序列分析。用分離的CPV分離株對健康犬進行人工感染實驗,十天內(nèi)所感染犬均出現(xiàn)典型的犬細小病毒感染臨床癥狀,其中CPV-CN-5株感染犬以死亡告終。病毒檢測結(jié)果顯

4、示不同時間我國不同地方送檢病料細小病毒陽性率比較高,推斷CPV和FPV在我國犬科和貓科動物普遍存在。9株CPV病毒和7株FPV株病毒均能在F81細胞上生長,產(chǎn)生典型的肉食獸細小病毒細胞病變。通過人工感染實驗,篩選出一株強毒株,為CPV的預(yù)防提供了實驗數(shù)據(jù)。序列分析表明分離的16株病毒的VP2基因全長均為1755bp,編碼584個氨基酸,與國外FPV標準毒株CU-4 VP2基因大小相同;所分離的7株FPV之間核苷酸同源性為99.93%;氨

5、基酸的同源性為99.8%,與Genbank所登錄的國內(nèi)外FPV的VP2基因序列比較,核苷酸同源性為99.62%,其氨基酸同源性為99.75%。對所分離的9株CPV病毒株進行序列分析,發(fā)現(xiàn)CPV分離株之間的核苷酸同源性為99.41%,氨基酸同源性為99.05%,與國內(nèi)外CPV分離株VP2基因核苷酸同源性在99.40%-99.44%之間,氨基酸同源性在98.99%-99.14%之間。FPV VP2基因的系統(tǒng)發(fā)生分析表明,F(xiàn)PV分離株核苷酸大

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