1、豬瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的豬的高度接觸性、傳染性疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大威脅和經(jīng)濟損失，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報告的法定傳染病之一。CSFV中等致病力毒株造成慢性感染，疫苗株能對機體產(chǎn)生免疫保護作用。通過研究CSFV中等致病力毒株和疫苗株體外感染豬外周血單核細胞(PBMC)及人工感染實驗用豬后，對細胞因子轉錄

2、和表達的影響，系統(tǒng)分析CSFV中等致病力毒株感染及疫苗免疫對機體免疫系統(tǒng)的影響，為闡釋CSF慢性感染的機制提供理論依據(jù)。
　　 分別使用CSFV中等致病力毒株HeBHH1/95及HCLV體外感染PBMC，在24hpi、48hpi，運用qRT-PCR技術對白介素、趨化因子、毒性反應相關分子、IL-1β轉換酶、粘附分子、抗病毒作用相關分子、干擾素及干擾素調控因子、細胞因子受體共59種免疫相關分子進行全面測定。結果顯示：在24hpi，

3、HeBHH1/95感染引起9種細胞因子轉錄水平上調，50種下調，MCP-1、IL-1α、IL-1β、IL-8、IL-6轉錄水平顯著上調(RQ>2.1)。IL-1α轉錄水平上調最顯著(RQ=3.16)，IFN-α轉錄水平下調最顯著(RQ=0.54)；HCLV感染引起9種細胞因子轉錄水平上調，50種下調，MCP-1、IL-1α、IL-1β、IL-8、IL-10、TGF-β2轉錄水平上調(RQ>2)。MCP-1轉錄水平上調最顯著(RQ=3.0

4、2)，IFN-α轉錄水平下調最顯著(RQ=0.447)。在48hpi，HeBHH1/95感染引起12種細胞因子轉錄水平上調，TLR-4和IFN-α不變，45種下調，IL-1α、MCP-1、IL-8轉錄水平上調最顯著(RQ>2)，IL-1α轉錄水平上調最顯著(RO=2.75)，IL-12p35轉錄水平下調最顯著(RQ=0.427)；HCLV感染引起12種細胞因子轉錄水平上調，47種下調，MCP-1、IL-1α、IL-1β、IL-8轉錄水平

5、顯著上調(RQ>23)。IL-1α轉錄水平上調最顯著(RQ=2.63)，TGF-R轉錄水平下調最顯著(RQ=0.295)。HeBHH1/95與HCLV體外感染均能導致PBMC體外培養(yǎng)系免疫相關因子轉錄水平變化，IL-1α、IL-1β、IL-8等炎性相關因子轉錄水平均顯著升高，毒性反應相關分子、IL-1β轉換酶、粘附分子類細胞因子均顯著下降，但在抗病毒因子轉錄改變機制上具有差異，如HCLV誘導Rantes上升，HeBHH/95則下調。綜上

6、所述，提示CSFV中等致病力毒株HeBHH1/95和HCLV體外感染24hpi和48hpi均可誘導機體炎癥反應，但在誘導機體細胞抗病毒感染應答機制上具有差異。
　　 將23頭實驗用豬(60日齡)隨機分為攻毒組、疫苗組和對照組，定期采血(0 dpi、1 dpi、2dpi、5 dpi、7 dpi、9 dpi、12 dpi、16 dpi、20 dpi、23 dpi、28 dpi、30 dpi、35dpi、43 dpi)，采用qRT-P

7、CR技術、流式細胞儀和ELISA技術，檢測豬外周血中10種細胞因子轉錄水平、淋巴細胞亞群分析和豬瘟抗體水平。結果顯示：HeBHH1/95感染組實驗豬存活43dpi以上，在感染過程中T淋巴細胞減少和免疫抑制是豬瘟慢性感染早期的臨床特征，具有直接殺傷能力的γδT細胞、殺傷性T細胞和輔助型T細胞的數(shù)量降低均開始于2dpi，而不具備直接殺傷能力的活化記憶T細胞數(shù)量的降低開始于9dpi。在HeBHH1/95感染后，所有檢測抗病毒因子(IL-1α、

8、IL-2、IL-4、IL-8、IFN-α、IFN-β、TNF、Mx1、PKR和OAS)均顯著上升。HCLV疫組在5-7dpi時淋巴細胞絕對數(shù)量略有上升，在12dpi到達高峰，對照組差異顯著(P<0.05)，而后逐漸下調并趨于穩(wěn)定。進一步的流式細胞儀檢測結果顯示淋巴細胞數(shù)量的提升主要是由于輔助性T細胞數(shù)量的增多。在HCLV免疫組中，CSFV抗體開始呈現(xiàn)陽性(阻斷率>40％)出現(xiàn)在9-12dpi之間，在此期間IL-8轉錄水平大幅上調，這兩者

9、增長與抗體形成的相關性揭示了Th細胞通過增殖誘導B淋巴細胞成熟，誘導細胞因子表達產(chǎn)生特異性CSFV抗體，并形成免疫保護機制。
　　 綜上所述，通過對CSFV體外PBMC感染和實驗動物CSFV慢性感染/免疫后的各免疫相關因子動態(tài)變化進行全面研究，通過比較感染前/后和免疫前/后各指標變化，分析了病毒在逃避宿主免疫過程和形成特異性抗體中起關鍵作用的細胞及細胞因子的動態(tài)變化，為探索細胞因子作用奠定的基礎，為闡述CSFV慢性感染和免疫的機