1、昆蟲抗菌肽是昆蟲免疫誘導產(chǎn)生的一系列小分子多肽，對昆蟲的抗病能力起著重要的作用。昆蟲抗菌肽具有殺菌能力強、抗菌譜廣等特點，而引起人們的普遍關注。家蠶作為支撐蠶絲產(chǎn)業(yè)的重要經(jīng)濟昆蟲，因此提高其抗病性的研究對提高蠶絲生產(chǎn)有著重要的意義。家蠶是鱗翅目昆蟲中的模式生物，國內外研究者已經(jīng)對家蠶的抗菌肽做了大量的研究工作，發(fā)現(xiàn)家蠶中存Cecropin、Moricin、Attacin、Defencin、Gloverin、Lebocin這六大類抗菌肽基

2、因，這些基因對家蠶的抗病能力應該發(fā)揮著重要的作用。近年來，隨著基因工程技術的發(fā)展，通過轉基因手段培育抗病性強的新品種成為新的育種研究方向，人們把昆蟲抗菌肽基因導入動植物染色體，已經(jīng)獲得了抗病性強的轉基因動植物，為選育高抗性的動植物品種作出了重要的探索。 本研究基于本實驗室構建的家蠶轉基因技術平臺，選擇對革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌有抗菌活性的家蠶Moricin2基因(NCBI LOCUS:AB006915.1)和對革蘭氏陰性菌有抗

3、菌活性的家蠶Lebocin3基因(NCBI LOCUS:AB003035)，構建轉基因表達載體并導入家蠶基因組中，探索轉內源性抗菌肽基因后對家蠶抗菌能力和生長發(fā)育的影響。本研究獲得的如下結果： 1.抗菌肽轉基因表達載體的構建 將主要在家蠶脂肪體表達的SDH啟動子與Morcin2基因構建成融合轉基因表達載體pBac[3×P3-EGFP+SDH-Mor]；將Lebocin3基因分別與SDH啟動子或在家蠶全身廣譜表達的IE1啟

4、動子構建成兩個融合轉基因表達載體，即pBac[3×P3-DsRed+IE1-Leb]和pBac[3×P3-DsRed+SDH-Leb]。 2.轉基因蠶的制作與分子檢測 將構建好的pBac[3×P3-EGFP+SDtt-Mor]、pBac[3×P3-DsRed+IE1-Leb]和pBac[3×P3-DsRed+SDH-Leb]3個轉基因表達載體通過蠶卵顯微注射后，在G1代進行熒光篩選，分別得到40、30、36頭熒光蠶。

5、 對每個陽性轉基因家蠶品系隨機抽取一個個體進行Southern blot檢測，分析結果表明，目的基因表達盒都已經(jīng)整合到家蠶基因組上，即成功構建了SDH-Mor、IE1-Leb和SDH-Leb轉基因系。 3.轉基因家蠶中Moricin2和Lebocin3抗菌肽基因的表達分析 抽提3個轉基因系和對照的脂肪體總RNA，合成cDNA后進行半定量RT-PCR檢測，結果表明：(1)SDH-Mor和對照脂肪體中Moricin2基因

6、mRNA的相對表達量分別為0.72±0.018和0.43±0.0093，Moricin2基因mRNA相對表達量提高差異極顯著；(2)IE1-Leb、SDH-Leb和對照脂肪體中Lebocin3基因mRNA的相對表達量分別是0.73±0.015、0.71±0.017和0.42±0.0091，兩個轉基因系中Lebocin3基因mRNA的相對表達量比對照顯著提高，但是兩個轉基因系間差異不顯著。 4.轉基因蠶的抗菌能力分析和生長發(fā)育情況

7、觀察 對SDH-Mor轉基因系和對照2齡起蠶添食蘇云金芽孢桿菌，試驗結果表明，當蘇云金芽孢桿菌濃度為1.25×108個/mL，時，SDH-Mor轉基因系比對照對蘇云金芽孢桿菌的抗性提高了約24.4％。 對IE1-Leb轉基因系和SDH-Leb轉基因系與對照2齡起蠶添食E.coli，實驗結果顯示，當E.col濃度為1.4×109個/mL時，IE1-Leb轉基因系和SDH-Leb轉基因系對E.coli的抗性比對照分別提高了約