1、研究背景：1971年，美國學者Folkman首先提出“腫瘤生長依賴血管生成”的著名學說，并由此提出了抑制腫瘤生長的新途徑-抗血管生成(antiagiogensis)。隨后許多學者經研究證實了腫瘤血管生成在實體瘤生長、發(fā)展、浸潤及轉移中的重要作用。大部分腫瘤的生長和轉移均依賴于腫瘤的血管生成，腫瘤的生長可分為無血管期和血管期，腫瘤直徑達1～2mm時，腫瘤分泌若干因子刺激血管形成，獲得供血的腫瘤繼續(xù)增大乃至轉移。因此，近年來阻斷腫瘤血管形成

2、成為治療腫瘤的新方法。腫瘤血管形成受許多因素的調節(jié)，其中，具有重要研究意義的是血管內皮細胞生長因子(Vascular endothelial groth factor，VEGF)。它能促進血管內皮細胞的增殖，同時，也能促進腫瘤細胞的轉移。VEGF通過與血管內皮細胞上的特異性受體VEGF受體(VEGFR)結合發(fā)揮生物學效應。 VEGFR-1對VEGF發(fā)揮雙重效應：在生理情況下，主要起負向調控VEGF的生物學作用，而在某些病理情況

3、下VEGFR-1可以發(fā)揮正向調控VEGF的作用，其介導的信號轉導在血管內皮細胞增生和血管通透性增加方面起了重要作用。因此，VEGF及其受體就成了腫瘤治療的理想靶點。因此，對血管內皮細胞生長因子受體(VEGFR)的研究將具有重要意義。 目的：擴增目的基因VEGFR-1，構建pET-28a(+)/VEGFR-1重組體，在大腸桿菌中高效表達VEGFR-1蛋白，純化VEGFR-1蛋白。 方法：以本實驗室構建的克隆質粒為模板，設計

4、合適引物，連接PCR擴增產物與pET-28a(+)質粒，把該質粒命名為pET-28a(+)/VEGFR-1，把該質粒移進DH5α感受態(tài)細胞，篩選陽性菌株，提取質粒，把質粒移進BL21感受態(tài)細胞，篩選陽性菌株，用IPTG誘導表達VEGFR-1蛋白質，超聲破菌，經鎳凝膠親和層析純化蛋白。 結果：成功構建pET-28a(+)/VEGFR-1重組體；SDS-PAGE電泳顯示，融合蛋白的表達量顯著，分子質量約17kD。 結論：在大