1、Rs1046AB是派生于宜3A的純合型甘藍型油菜顯性細胞核雄性不育系，具有敗育徹底、不育性穩(wěn)定和恢復源廣泛等特點。1985年，李樹林等經(jīng)過大量的遺傳分析后，提出甘藍型油菜顯性核不育材料宜3A的育性受兩對顯性基因互作控制的遺傳假說，其中一對為顯性不育基因，另一對為顯性上位抑制基因，當顯性不育基因單獨表達時可以導致雄性不育，而當顯性上位抑制基因存在時，育性又可以恢復正常。最近宋來強等（2006）通過遺傳分析表明利用一對復等位基因控制的模式來

2、解釋Rs1046AB的遺傳更加合理，即Ms為顯性不育基因，Mf為等位顯性恢復基因，ms為正常可育位點，并且具有Mf>Ms>ms的顯性遺傳效應。以Rs1046AB為主要材料，洪登峰（2006）已利用一個192株的F2群體對Rs1046AB的不育基因和恢復基因進行了初步定位。以此為基礎，本研究中通過不育系Rs1046A和恢復系195-14A（溫敏型細胞質雄性不育兩用系）雜交構建F2：3家系和F2全不育株群體，利用分子標記技術篩選與不育基因M

3、s和恢復基因Mf連鎖的分子標記，進一步開展顯性核不育基因與恢復基因（Ms/Mf）的精細定位研究，取得的主要結果和結論如下：
　　 1．將3個AFLP標記E3M10、E1M13和S5T5（洪登峰，2006）成功轉化為SCAR標記（依次命名為：SCD2、SCD7和SCD8）。，并結合SCAR標記SCE3（陸光遠，2003）和SCHDF（洪登峰，2006），進一步分析708個單株構成的F2：3家系和987個單株的F2全不育株群體，結果

4、表明：SCD2、SCE3、SCD7和SCD84個SCAR標記全部位于目標基因一側，距目標基因（Ms/Mf）的遺傳距離依次為2.0cM、1.7cM、1.5cM、0.1cM，另外一個SCAR標記SCHDF位于目標基因的另一側，且距目標基因的遺傳距離為2.3cM，實現(xiàn)了對目標基因的準確定位。
　　 2．應用BSA法，結合AFLP技術，繼續(xù)篩選了512對AFLP的引物組合，獲得了4個與目標基因緊密連鎖的AFLP標記。其中2個標記（P1M

5、1、P1M4）為共顯性標記，被定位于SCAR標記SCD7與SCD8之間。另外2個標記（P3M2、P12M6）為顯性標記，與恢復基因連鎖，分別位于目標基因兩側，前者被定位于SCAR標記SCD7和SCD8之間，后者被定位于標記SCHDF與目標基因之間，使目標基因的遺傳距離進一步縮小。
　　 3．通過比較測序，將Song et al．，（2006）在甘藍型油菜顯性核不育系609AB中獲得的不育基因兩側最近的SCAR標記SC6和SC9進

6、行整合，并成功轉化為既與不育基因連鎖又與恢復基因連鎖的SCAR標記，重新被命名為SC6D和SC9H。前者被定位于AFLP標記P12M6與目標基因之間，后者被定位于AFLP標記P3M2和P1M1/P1M4之間，且分別距目標基因的遺傳距離均為1.0cM。結合上述AFLP標記和SCAR標記，在本研究中實現(xiàn)了對目標基因（Ms/Mf）的精細遺傳定位。
　　 4．利用DH群體TN（Tapidor×Ningyou7）的遺傳圖譜將目標基因Ms/

7、Mf定位于甘藍型油菜的N8連鎖群，并在N8連鎖群上成功開發(fā)出一個與Ms/Mf基因連鎖的共顯性SSR標記HUA348，實現(xiàn)了目標基因精細定位圖譜與已公布的甘藍型油菜圖譜的整合。
　　 5．根據(jù)目標基因區(qū)段與對應擬南芥同源區(qū)的信息（洪登峰，2006），在目標基因兩側標記之間，設計18對特異引物（DFN1-DFN18）對目標區(qū)段進行擴增，結果除了DFN03、DFN12、DNA14和DFN18等4對引物外，其余14對引物都同時擴增出不育

8、基因和恢復基因，對這14對引物進行比較測序分析之后再次設計引物，結果仍然沒有開發(fā)出新的分子標記。
　　 6．以與目標基因緊密連鎖的SCAR標記SCD8為探針進行Southern雜交，篩選甘藍型油菜Tapidor BAC文庫，獲得了29個具有強雜交信號的BAC克隆。
　　 7．利用DFN1、DFN5、DFN8、DFN16和SCD8共5對引物通過PCR分析的方法對所獲得的29個BAC克隆進行陽性驗證，結果依據(jù)其中的18個克隆