1、農作物的生長、產(chǎn)量與品質受環(huán)境中存在的許多不利因素的嚴重影響。面對這些挑戰(zhàn)，植物進化出許多適應機制。作為植物體中較大的一類轉錄因子家族，NAC轉錄因子在植物體的生長發(fā)育、生物及非生物脅迫響應過程中發(fā)揮了重要作用。雖然油菜是一種十分重要的油料作物，但是目前關于油菜中NAC轉錄因子家族成員的功能了解還很少。在本文中，我們對油菜中的兩個NAC轉錄因子基因在活性氧(ROS)累積及細胞死亡過程中的功能與調控機制進行了初步研究。
　　首先，我

2、們從油菜中分離并克隆了BnaNAC56及BnaNACa基因，并發(fā)現(xiàn)BnaNAC56的表達受多種脅迫的誘導，如脫落酸(abscisic acid，ABA)、茉莉酸(jasmonic acid,JA)、百草枯(methyl viologen，MV)以及腐生型真菌病原體核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）等;相反，BnaNAC56的表達受到冷害脅迫的誘導。亞細胞定位及雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測表明BnaNAC56定位于細胞核

3、內而且是一個轉錄激活子。煙草葉片中瞬時表達BnaNAC56基因以后，發(fā)現(xiàn)其能夠引起ROS累積以及類似超敏反應的細胞死亡現(xiàn)象。隨后我們進行了二氨基聯(lián)苯胺(3，3-diaminobenzidine，DAB)染色并測定了一系列與ROS及細胞死亡相關的生理指標，如相對電導率、丙二醛、葉綠素以及H2O2等，這些結果均表明煙草葉片中出現(xiàn)ROS累積及細胞死亡現(xiàn)象。同時，末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP粘性末端標記法（TUNEL）以及DNA梯型分析試

4、驗也表明BnaNAC56的表達誘導DNA片段化。此外，免疫印跡(Western blot)檢測發(fā)現(xiàn)BnaNAC56以及對照GFP確實在煙草葉片中表達，說明煙草葉片出現(xiàn)的類似超敏反應的細胞死亡確實由BnaNAC56蛋白誘發(fā)。為了進一步確定BnaNA C56的功能，我們分離并制備了油菜原生質體，并利用PEG4000介導的方式分別轉染BnaNAC56及GUS瞬時表達質粒，試驗結果發(fā)現(xiàn)，與對照GUS相比，表達BanNAC56的油菜原生質體確實能

5、夠誘導ROS的累積以及細胞死亡。我們還進行了實時熒光定量qRT-PCR(real-time quantitative RT-PCR)試驗，檢測了與ROS、細胞死亡、防御反應相關的一些標志基因的表達，發(fā)現(xiàn)某些標志基因的表達水平被顯著誘導，而且雙熒光素酶報告系統(tǒng)(Dual-LUC assay)也表明這些被誘導表達的標志基因確實能夠被BnaNAC56激活。以上結果表明，BnaNAC56能夠作為一個脅迫響應的轉錄激活子發(fā)揮功能并且在ROS累積及

6、細胞死亡調控過程中起到十分重要的作用。
　　類似地，我們開展了有關BnaNACa的功能研究。首先，我們將其在煙草葉片中瞬時過表達，發(fā)現(xiàn)煙草葉片中出現(xiàn)與BnaNAC56類似的現(xiàn)象，即ROS累積和類似超敏反應的細胞死亡。DAB染色結果顯示煙草葉片表達BnaNACa的部位出現(xiàn)了明顯的H2O2累積，而且H2O2含量的測定結果也顯示隨著BnaNACa表達時間的延長，H2O2的含量不斷增加。此外，葉綠素、丙二醛、花青素含量以及相對電導率的測定