1、本研究根據(jù)GenBank收錄的PPRV Nigeria/75/1(1830bp)株H基因全序列，設(shè)計(jì)一對(duì)引物H-R、H-F，用于擴(kuò)增PPRV H基因，上游引物引入BamH I限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，下游引物也引入BamH I限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，對(duì)pTOP-H質(zhì)粒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并克隆至pGM-T載體中，轉(zhuǎn)化E.coli TOP10感受態(tài)細(xì)胞，獲得重組質(zhì)粒pGM-T-H，將重組質(zhì)粒經(jīng)BamH I雙酶切產(chǎn)物插入原核表達(dá)載體pET-32a(+)，構(gòu)建

2、原核表達(dá)載體pET-32a-H，將其轉(zhuǎn)化進(jìn)BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中后用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，收集菌液進(jìn)行SDS-PAGE電泳和Western-blotting分析，結(jié)果表明，小反芻獸疫病毒H基因在BL21(DE3)成功表達(dá)，所表達(dá)融合蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量約為80ku(目的基因的蛋白分子質(zhì)量為58ku，載體HIS分子質(zhì)量為22ku)，與理論推測(cè)的蛋白分子量一致；經(jīng)Western-blotting證明，表達(dá)所得蛋白能被小反芻獸疫羊標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血