1、本研究黃河鯉（Cyprinus carpio）為試驗對象，在對黃河鯉金屬硫蛋白(Metallothionein，MT)基因的克隆及序列分析、黃河鯉MT基因的組織表達分析的基礎上通過實時熒光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）監(jiān)測分析水體銅脅迫下黃河鯉MT基因表達變化規(guī)律，以期從分子生物學角度為水體銅污染監(jiān)測提供新的分子標志物。主要研究結果如下：
　　1、采用R

2、T-PCR方法成功克隆了黃河鯉MT基因的編碼區(qū)（Coding sequence，CDS）序列，全長183bp，共編碼60個氨基酸，不含芳香族氨基酸和組氨酸，其中20個半胱氨酸（Cys）集中分布在肽鏈的氨基端（N-端）和羧基端（C-端），具有脊椎動物MT典型的Cys-X-Cys、Cys-X-X-Cys、Cys-X-Cys-Cys保守序列結構[1]，預測分子量為6013D，理論等電點為8.38。經(jīng)核苷酸多序列比對與高身鯽（Carassius

3、 cuvieri）同源性最高，為94％，氨基酸序列比對與稀有鮈鯽（Gobiocypris rarus）同源性最高，為95%。黃河鯉MT分子進化親緣性與其生物學分類地位基本一致。
　　2、依據(jù)獲取的黃河鯉MT基因片段合成高特異性的引物，采用優(yōu)化退火溫度及構建標準曲線提高引物擴增效率，逐步摸索并成功建立了監(jiān)測黃河鯉MT基因表達水平的RT-qPCR的程序方法[2]。以β-actin為內參，分析了黃河鯉MT基因的表達具有明顯的組織差異性，

4、其中肝胰臟MT表達量最高，其次是腎臟、腦和鰓，肌肉中最少，其中以肌肉組織MT基因的相對表達量為基準單位―1‖，則肝胰臟的MT基因表達量為56，腎臟、腦和腮依次為16.6、7.9和3.4。
　　3、同時用0、0.10、0.30、0.60、1.0、1.5mg/LCu2+體外染毒刺激黃河鯉，采用PCR（RT-qPCR）監(jiān)測分析不同時間點（6h、12h、24h、48h、96h、192h、12d、16d）肝胰臟、腎臟、腮、肌肉和腦組織金屬硫

5、蛋白（MT）基因的表達量。結果表明，銅誘導下黃河鯉MT基因均表達上調且具有明顯的組織差異性：不同濃度間存在一定劑量-效應關系，在誘導的前期（0-96h）存在一定的時間-效應[3]；不同組織間MT基因上調量不同，其中肝胰臟最多，其次為腎臟、鰓和腦，肌肉上調最少，在整個誘導期除肝胰臟MT基因表達量不斷增加外，其他4個組織MT整體均呈先增高后下降的發(fā)展狀態(tài)，但各個組織的誘導峰值及達到其誘導峰值的誘導時間不盡相同[4]；肝胰臟、腎臟、鰓、腦和肌