1、浙江大學碩士學位論文Hbxknockdown對HepG2.2.15細胞HBV復制和線粒體鈣通道的影響及其表達譜分析姓名：謝海洋申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學；乙肝相關性肝病指導教師：鄭樹森201104浙江大學碩士學位論文 摘要因表達譜，為后續(xù)的深入相關基因功能和調控機制研究奠定基礎。方法：本研究通過合成H B x 基因1 6 9 4 起始位點s i R N A ，轉染含H B V 全基因組的H e p G 2 ．2 ．1 5 細胞，運用

2、微粒子酶免疫分析技術( M E l A ) 對H B V 表面抗原( H B s A g ) 、e 抗原( H B e A g ) 進行定量檢測，R e a I - t i m e P C R 分析H B x m R N A 及H B V D N A 拷貝數(shù)的變化．運用流式細胞儀定量分析胞內線粒體M P T P 狀態(tài)變化引發(fā)c a l c e i n 激發(fā)的熒光強度變化，利用A 衄m e 研x 表達譜芯片篩選H B x K n o c

3、k d o 啪前后的差異表達基因，對部分基因用R e a l - t i m e P C R 進行驗證。結果：H B xs i I 洲A 1 6 9 4 可明顯下調H e p G 2 ．2 ．1 5 細胞H B xm R N A 的表達，抑制培養(yǎng)上清H B s A g 和H B e A g 的表達分泌，減低培養(yǎng)上清H B VD N A 拷貝數(shù)；H B xs i R N A l 6 9 4 和M 胛P 抑制劑環(huán)孢素A ( C s A ，C

4、 y c I o s p o r i n eA ) 可拮抗胞內鈣離子釋放劑A 2 3 1 8 7 引發(fā)的c a I c e i n 熒光強度的降低。H B x K n o c k d o w n 前后表達譜芯片結果顯示差異2 倍( P < 0 ．0 5 ) 以上的基因有3 8 5 個，其中在H B x s i R N A l 6 9 4 處理后明顯下調的有2 8 8 個基因，9 7 個基因明顯上調表達，并對H s P B 8 、P