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文檔簡介
1、復雜生物體系中的蛋白質的分離分析是一項具有挑戰(zhàn)性的任務,是生物醫(yī)學領域研究中的一個重要部分,需要最先進的分離技術和復雜精細的儀器裝置。毛細管區(qū)帶電泳(capillary zone electrophoresis,CZE)及其衍生出的一系列分離技術不僅具有分離效率高、分析時間短的優(yōu)點,而且對樣品和試劑消耗極少,非常適合蛋白質的分離分析,在蛋白質組學研究中有巨大的應用潛力。利用毛細管電泳(capillary electrophoresis,
2、CE)技術分離蛋白質的應用研究,主要集中于人體體液、農(nóng)產(chǎn)品和藥物的分析上,主要面對的問題是被分析蛋白在毛細管壁的吸附問題。毛細管壁對蛋白質的吸附會造成一系列危害:如樣品回收率降低,基線不穩(wěn)定,結果的重復性變差,定性定量困難等,最終還將極大地影響毛細管柱的使用壽命。因此人們一直在探索各種方法,以減小毛細管電泳過程中的蛋白質吸附現(xiàn)象,提高分離效率,物理吸附涂層方法由于涂層的制作簡單且具備一般分離所需的穩(wěn)定性而備受青睞。本文對陽離子聚合物物理
3、涂層的設計合成與其在分離堿性蛋白質時的效果及機理進行了研究。主要內容如下:
⑴使用原子轉移自由基聚合(ATRP)方法合成了具有不同聚(4-乙烯基吡啶)(P4VP)嵌段長度的聚(4-乙烯基吡啶)-b-聚乙二醇-b-聚(4-乙烯基吡啶)(P4VP-b-PEG-b-P4VP)三嵌段聚合物,并用核磁共振氫譜及凝膠滲透色譜對其結構及分子量分布進行了表征。
⑵將P4VP-b-PEG-b-P4VP用作毛細管內壁的物理涂層材
4、料,對堿性混合蛋白質進行了分離,并研究了緩沖液pH對涂層性能的影響,比較了不同P4VP嵌段長度的三嵌段聚合物涂層的性能,以及和兩嵌段聚合物涂層相比的優(yōu)缺點。三嵌段聚合物P4VP-b-PEG-b-P4VP具有pH敏感性,通過緩沖液pH的調控可以控制電滲流的速度,調節(jié)待分析組分的分離度和分離時間。
⑶測量了裸管和三嵌段聚合物涂層管中蛋白質與毛細管壁間的靜電相互作用,證明了陽離子聚合物涂層對堿性蛋白質吸附的屏蔽作用,并進一步測算
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