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文檔簡介
1、首先對掃描電化學顯微鏡(SECM)的實驗裝置和工作模式進行了簡要的介紹。然后就SECM的下述兩個方面進行了較詳細的介紹。1.介紹了SECM探頭的發(fā)展。2.介紹了SECM在細胞和酶分析方面的應用。 第一章制作了雙金微米電極,對其進行了表征,并與單根金微米電極的表征結果進行了比較,結果顯示兩者無顯著性差異。并將此電極用作SECM的探頭分別作了向導體基底和絕緣體基底的探頭逼近曲線,與理論曲線擬合后基本重合,說明我們做的雙電極能用作SE
2、CM實驗中。 第二章用掃描電化學顯微鏡同時成像單個活細胞內的過氧化物酶活性和細胞形貌。首先,用SECM的收集模式確定了測定PO的最佳條件。又利用毛地黃皂苷(Dig)能溶解細胞膜上的膽固醇的性質,在細胞膜上產生微孔。細胞內的大分子(如酶)仍然被禁錮在細胞內部,而小分子物質(如酶的底物和產物)則可以進出細胞。經過Dig處理后的細胞仍能存活。當溶液中加入PO的底物(H2Q和H2O2)后,它們可以擴散到細胞內,并在細胞內PO的催化下反應
3、生成BQ和水。將雙電極探頭的一支電極的電位恒定于BQ發(fā)生還原反應的電位,用SECM就可以測得細胞周圍BQ在探頭上產生的電流,獲得細胞表面BQ濃度分布的形貌圖。同時溶液中加入K4Fe(CN)6,將另一根電極的電位恒定于K4Fe(CN)6發(fā)生氧化反應的電位,當探頭掃過細胞時,由于細胞有一定的高度,所以K4Fe(CN)6的氧化電流會有所降低(此時細胞相當于一個絕緣體基底),從而測得了細胞的形貌。 第三章用SECM同時測得了單個鼠肝細胞
4、中的堿性磷酸酶(ALP)和細胞的呼吸活性。首先用收集模式確定了檢測ALP的最佳條件。用毛地黃皂苷(Dig)對細胞進行穿孔。然后加入酶的底物(PAPP),在ALP的催化水解下生成PAP。將雙電極探頭的金電極電位恒定于PAP發(fā)生氧化反應的電位,用SECM就可以測得細胞周圍PAP在探頭上產生的電流,從而測得細胞內ALP的活性。同時固定另一根電極(鉑電極)的電位為O2發(fā)生還原反應的電位,由于細胞呼吸要消耗氧,所以細胞周圍O2的濃度要比本體溶液的
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