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文檔簡介
1、借助于粗糙貴金屬表面數(shù)百萬倍的信號增強效應,表面增強拉曼光譜(Surface-Enhanced Raman Spectroscopy,SERS)技術可檢測低至單分子水平的目標物,已經(jīng)成為目前最靈敏的分析方法之一。表面增強拉曼光譜免疫分析(SERS Immunoassay,SERSIA)技術是一種結合了表面增強拉曼光譜的高靈敏度和免疫分析(Immunoassay,IA)的高特異性的超靈敏分析技術,并在近些年受到了持續(xù)的關注。然而目前該方法
2、卻也存在如下幾個方面的問題:
①操作復雜:材料的制備和預處理、孵育、洗滌、封閉等步驟不僅耗時而且繁瑣;
?、谥噩F(xiàn)性低:雖然SERSIA靈敏度高,但現(xiàn)有大部分方法都難以采集到均勻的拉曼信號;
③模式單一:SERSIA的分析對象多以大分子物質(zhì)如蛋白質(zhì)或者細胞為主,亟需拓展到其他領域比如檢測小分子物質(zhì);
?、艹杀靖撸耗壳癝ERSIA活性基底多為貴金屬材料,拉曼儀器和設備不僅采購、維護成本高昂,而且上機操作復
3、雜,這些問題都在一定程度上限制了SERSIA技術的應用。
針對上述問題,本論文首先以拉曼信號的均勻度為依據(jù),初步考察了幾種SERSIA基底材料;其次以硝酸纖維素膜(Nitrocellulose membrane,NC)為SERSIA基底,并基于膠體金免疫層析法(Immunochromatographic Assay,ICA)提出了一種使用便攜式表面增強拉曼光譜儀的簡便、快速、低成本而又超靈敏的表面增強拉曼光譜免疫層析技術(SE
4、RS-ICA);最后運用該方法檢測了兩種不同分子量的目標物,通過一些條件的優(yōu)化,均得到優(yōu)異的檢測結果。論文的主要工作有以下三個方面:
?、俪晒χ苽淞死鼧擞浢庖吣z體金,并結合便攜式表面增強拉曼光譜儀和課題組制備的鹽酸克倫特羅(Clenbuterol,CL)多克隆抗體和包被抗原,初步考察了SERSIA中的幾種基底材料,并發(fā)現(xiàn):磁珠@Au工藝復雜,檢測難度大且重現(xiàn)性低;貴金屬基底雖然性能較好,但是價格昂貴;功能化玻片雖然成本低,但探
5、針分布過于分散、過程繁瑣且耗時;而基于新型SERS-ICA法的NC膜不僅成本低、易操作、簡便、快捷,而且拉曼標記免疫探針高度集中在約150μm寬的檢測線(T線),可采集到更為均勻的信號。
?、谕ㄟ^在膠體金表面分別標記拉曼標記分子和抗體,將SERS和ICA有機結合,建立了新型的SERS-ICA法用于檢測鹽酸克倫特羅,并優(yōu)化了一些實驗條件,獲得優(yōu)異的檢出效果,靈敏度為0.01ngmL-1,檢出限為0.06pgmL-1,還評價了方法的
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